| 摘要 | 第6-8页 |
| ABSTRACT | 第8-10页 |
| 缩略词表 | 第17-18页 |
| 第一章 引言 | 第18-34页 |
| 1.1 植物的抗逆反应 | 第18-21页 |
| 1.1.1 氧爆发及活性氧清除机制 | 第18-19页 |
| 1.1.2 植物先天免疫系统与系统获得抗性 | 第19-21页 |
| 1.2 信号分子 | 第21-25页 |
| 1.2.1 SA | 第21页 |
| 1.2.2 JA | 第21-22页 |
| 1.2.3 H_2O_2 | 第22-23页 |
| 1.2.4 ET | 第23-25页 |
| 1.3 类萌发素蛋白 | 第25-33页 |
| 1.3.1 GLP的分类及结构特征 | 第25-27页 |
| 1.3.2 GLP在植物体内功能的多样性 | 第27页 |
| 1.3.3 GLP在植物体内的表达特性 | 第27-29页 |
| 1.3.4 GLP在植物体内的生理功能 | 第29-32页 |
| 1.3.5 GLP在植物抗逆反应中的作用机制 | 第32-33页 |
| 1.4 本课题的研究意义及目的 | 第33-34页 |
| 第二章 岷江百合LrGLP1基因的克隆与表达特性分析 | 第34-52页 |
| 2.1 前言 | 第34页 |
| 2.2 材料 | 第34-35页 |
| 2.2.1 植物材料 | 第34页 |
| 2.2.2 菌株和载体 | 第34页 |
| 2.2.3 主要试剂 | 第34-35页 |
| 2.2.4 缓冲液和培养基配方 | 第35页 |
| 2.3 方法 | 第35-41页 |
| 2.3.1 植物材料的处理及样品采集 | 第35-36页 |
| 2.3.2 RNA的提取及mRNA的分离 | 第36页 |
| 2.3.3 5 RACE | 第36-38页 |
| 2.3.4 T-A克隆 | 第38页 |
| 2.3.5 全长序列的克隆及生物信息学分析 | 第38-39页 |
| 2.3.6 基因编码区序列扩增及内含子分析 | 第39-40页 |
| 2.3.7 qRT-PCR | 第40-41页 |
| 2.4 结果与分析 | 第41-49页 |
| 2.4.1 LrGLP1全长cDNA克隆及内含子分析 | 第41-42页 |
| 2.4.2 生物信息学分析 | 第42-48页 |
| 2.4.3 表达谱分析 | 第48-49页 |
| 2.5 讨论 | 第49-52页 |
| 第三章 LrGLP1的原核表达及蛋白活性分析 | 第52-64页 |
| 3.1 前言 | 第52页 |
| 3.2 材料与试剂 | 第52-55页 |
| 3.2.1 菌株和载体 | 第52-53页 |
| 3.2.3 主要试剂 | 第53页 |
| 3.2.4 缓冲液和培养基配方 | 第53-55页 |
| 3.3 方法 | 第55-59页 |
| 3.3.1 LrGLP1-E的扩增 | 第55页 |
| 3.3.2 原核表达载体的构建 | 第55-57页 |
| 3.3.3 转化 | 第57-58页 |
| 3.3.4 融合蛋白的诱导表达及纯化 | 第58页 |
| 3.3.5 SOD活性测定 | 第58页 |
| 3.3.6 OXO活性测定方法 | 第58-59页 |
| 3.4 结果与分析 | 第59-63页 |
| 3.4.1 LrGLP1原核表达载体的构建及转化 | 第59-60页 |
| 3.4.2 LrGLP1的诱导表达 | 第60页 |
| 3.4.3 融合蛋白的纯化 | 第60-62页 |
| 3.4.4 融合蛋白的酶活性分析 | 第62-63页 |
| 3.5 讨论 | 第63-64页 |
| 第四章 LrGLP1的功能分析 | 第64-90页 |
| 4.1 前言 | 第64页 |
| 4.2 材料与试剂 | 第64-67页 |
| 4.2.1 植物材料 | 第64-65页 |
| 4.2.2 菌株和载体 | 第65页 |
| 4.2.3 主要试剂 | 第65页 |
| 4.2.4 缓冲液和培养基配方 | 第65-67页 |
| 4.3 方法 | 第67-73页 |
| 4.3.1 植物超表达载体的构建 | 第67页 |
| 4.3.2 农杆菌感受态细胞的制备 | 第67页 |
| 4.3.3 CaCl_2冻融法转化农杆菌感受态细胞 | 第67-68页 |
| 4.3.4 PCR反应 | 第68页 |
| 4.3.5 农杆菌活化 | 第68页 |
| 4.3.6 叶盘转化法 | 第68-69页 |
| 4.3.7 转基因烟草的筛选 | 第69页 |
| 4.3.8 转基因烟草中LrGLP1及防卫相关基因表达水平分析 | 第69-70页 |
| 4.3.9 不同非生物胁迫下转基因烟草种子的萌发情况 | 第70页 |
| 4.3.10 转基因烟草的胁迫处理 | 第70-71页 |
| 4.3.11 转基因烟草部分生理指标的测定 | 第71-72页 |
| 4.3.12 数据处理 | 第72-73页 |
| 4.4 结果与分析 | 第73-87页 |
| 4.4.1 LrGLP1植物超表达载体的构建 | 第73页 |
| 4.4.2 LrGLP1植物超表达载体转化根癌农杆菌 | 第73页 |
| 4.4.3 LrGLP1转基因烟草的产生 | 第73-74页 |
| 4.4.4 LrGLP1转基因烟草的筛选 | 第74页 |
| 4.4.5 转基因烟草中LrGLP1的转录水平分析 | 第74-75页 |
| 4.4.6 转基因烟草中部分防卫相关基因的转录水平分析 | 第75页 |
| 4.4.7 转基因烟草对尖孢镰刀菌的抗性 | 第75-79页 |
| 4.4.8 转基因烟草对干旱胁迫的耐受性 | 第79-82页 |
| 4.4.9 转基因烟草对NaCl胁迫的耐受性 | 第82-84页 |
| 4.4.10 转基因烟草对镉胁迫的耐受性 | 第84-87页 |
| 4.5 讨论 | 第87-90页 |
| 第五章 结论与展望 | 第90-94页 |
| 5.1 结论 | 第90-92页 |
| 5.2 展望 | 第92-94页 |
| 致谢 | 第94-96页 |
| 参考文献 | 第96-106页 |
| 附录 攻读硕士学位期间发表论文 | 第106页 |
