| 摘要 | 第6-7页 |
| Abstract | 第7页 |
| 第一章 绪论 | 第13-25页 |
| 1.1 灵芝及其生物活性物质概述 | 第13页 |
| 1.2 灵芝酸的药理 | 第13-15页 |
| 1.3 灵芝酸的结构 | 第15-17页 |
| 1.4 灵芝酸的生物合成途径及其关键基因的研究 | 第17-20页 |
| 1.4.1 灵芝酸的生物合成途径 | 第17-19页 |
| 1.4.2 灵芝酸生物合成相关的基因克隆 | 第19-20页 |
| 1.5 提高灵芝酸产量的方法 | 第20-23页 |
| 1.5.1 环境条件 | 第21页 |
| 1.5.2 诱导子策略 | 第21-22页 |
| 1.5.3 基因工程 | 第22-23页 |
| 1.6 立题的目的和意义 | 第23页 |
| 1.7 本论文的主要研究内容 | 第23-24页 |
| 1.8 本论文的技术路线 | 第24-25页 |
| 第二章 鲨烯合酶基因的克隆及工程菌株的构建 | 第25-53页 |
| 2.1 材料与仪器 | 第25-26页 |
| 2.1.1 实验材料 | 第25-26页 |
| 2.1.2 实验仪器 | 第26页 |
| 2.2 实验方法 | 第26-39页 |
| 2.2.1 SQS基因的克隆 | 第26-32页 |
| 2.2.2 表达载体pJW-EXP-SQS的构建 | 第32-37页 |
| 2.2.3 高表达SQS基因工程菌株的构建 | 第37-39页 |
| 2.3 结果分析与讨论 | 第39-52页 |
| 2.3.1 SQS基因克隆结果 | 第39-44页 |
| 2.3.2 表达载体pJW-EXP-SQS的构建 | 第44-51页 |
| 2.3.3 高表达SQS基因工程菌株构建结果 | 第51-52页 |
| 2.4 本章小结 | 第52-53页 |
| 第三章 高表达鲨烯合酶基因对灵芝酸的积累及中间代谢产物含量的影响 | 第53-71页 |
| 3.1 材料与仪器 | 第53-54页 |
| 3.1.1 实验材料 | 第53页 |
| 3.1.2 实验仪器 | 第53-54页 |
| 3.2 实验方法 | 第54-60页 |
| 3.2.1 高表达SQS基因灵芝工程菌株发酵培养 | 第54页 |
| 3.2.2 灵芝细胞干重的测定 | 第54页 |
| 3.2.3 培养基中残糖含量的测定 | 第54-56页 |
| 3.2.4 摇瓶培养条件下总灵芝酸的提取与检测 | 第56-57页 |
| 3.2.5 摇瓶培养条件下灵芝酸单体的提取与检测 | 第57-58页 |
| 3.2.6 摇瓶培养条件下中间代谢产物鲨烯和羊毛甾醇的提取与检测 | 第58-59页 |
| 3.2.7 数据处理与分析方法 | 第59-60页 |
| 3.3 结果分析与讨论 | 第60-69页 |
| 3.3.1 摇瓶培养条件下高表达SQS基因对灵芝细胞生长的影响 | 第60-61页 |
| 3.3.2 摇瓶培养条件下高表达SQS基因对总灵芝酸的影响 | 第61-63页 |
| 3.3.3 摇瓶培养条件下高表达SQS基因对灵芝酸单体含量的影响 | 第63-65页 |
| 3.3.4 摇瓶培养条件下高表达SQS基因对中间代谢产物鲨烯和羊毛甾醇积累的影响 | 第65-67页 |
| 3.3.5 静置培养条件下高表达SQS基因对细胞干重,总灵芝酸,鲨烯,羊毛甾醇以及四种灵芝酸单体含量的影响 | 第67-69页 |
| 3.4 本章小结 | 第69-71页 |
| 第四章 高表达鲨烯合酶对灵芝酸合成相关基因表达的影响 | 第71-79页 |
| 4.1 材料与仪器 | 第71页 |
| 4.1.1 实验材料 | 第71页 |
| 4.1.2 实验仪器 | 第71页 |
| 4.2 实验方法 | 第71-75页 |
| 4.2.1 总RNA的分离和提取 | 第71-72页 |
| 4.2.2 cDNA第一条链的合成 | 第72-73页 |
| 4.2.3 灵芝酸合成相关基因hmgr,ls,sqs表达水平的变化 | 第73-75页 |
| 4.2.4 数据处理与分析方法 | 第75页 |
| 4.3 结果分析与讨论 | 第75-78页 |
| 4.3.1 总RNA提取结果 | 第75-77页 |
| 4.3.2 高表达SQS基因对灵芝酸合成相关基因hmgr,ls,sqs,18s-rRNA表达量的影响 | 第77-78页 |
| 4.4 本章小结 | 第78-79页 |
| 第五章 结论与展望 | 第79-81页 |
| 5.1 全文结论 | 第79页 |
| 5.2 展望 | 第79-80页 |
| 5.3 本文创新点 | 第80-81页 |
| 致谢 | 第81-83页 |
| 参考文献 | 第83-91页 |
| 附录A 攻读硕士期间发表论文目录 | 第91-93页 |
| 附录B 标准曲线及荧光定量相关曲线 | 第93-99页 |
