| 摘要 | 第3-8页 |
| Abstract | 第8-15页 |
| 目录 | 第16-19页 |
| 引言 | 第19-21页 |
| 第一章 背景研究 | 第21-49页 |
| 第一节 肿瘤基因疗法概述 | 第21-27页 |
| 第二节 自杀基因疗法研究进展 | 第27-34页 |
| 一、自杀基因的定义 | 第27页 |
| 二、自杀基因疗法的旁杀伤效应及机制 | 第27-30页 |
| 三、肿瘤自杀基因疗法的增效方法 | 第30-34页 |
| 第三节 缝隙连接蛋白Cx43的相关研究 | 第34-39页 |
| 一、Cx43结构 | 第34-35页 |
| 二、调控Cx43的影响因素 | 第35-36页 |
| 三、Cx43与相关疾病的研究 | 第36-39页 |
| 第四节 中医学对肿瘤的认识及治疗法则 | 第39-43页 |
| 第五节 薯蓣皂苷及苷元的相关研究 | 第43-49页 |
| 一、薯蓣皂苷的相关研究 | 第43-47页 |
| 二、薯蓣皂苷元与肿瘤的相关研究 | 第47-49页 |
| 第二章 实验研究 | 第49-85页 |
| 第一部分 薯蓣皂苷对小鼠黑色素瘤细胞缝隙连接功能的影响 | 第49-63页 |
| 第一节 材料 | 第49-51页 |
| 第二节 方法 | 第51-56页 |
| 一、细胞培养、传代、冻存、复苏 | 第51-52页 |
| 二、MTT法测定薯蓣皂苷对小鼠B16细胞生长影响 | 第52页 |
| 三、流式细胞仪分析缝隙连接通讯功能 | 第52-53页 |
| 四、荧光定量PCR分析Cx43、Cx32和Cx26转录 | 第53-54页 |
| 五、Western blot检测Cx43、Cx32和Cx26表达 | 第54-56页 |
| 六、统计学分析 | 第56页 |
| 第三节 结果 | 第56-59页 |
| 一、MTT法检测薯蓣皂苷对B16细胞生长的影响 | 第56-57页 |
| 二、流式细胞术检测薯蓣皂苷对B16细胞株缝隙连接通讯功能的影响 | 第57-58页 |
| 三、荧光定量PCR检测薯蓣皂苷对B16细胞株缝隙连接蛋白基因转录的影响 | 第58-59页 |
| 四、Western Blot检测薯蓣皂苷对B16细胞株缝隙连接蛋白表达的影响 | 第59页 |
| 第四节 讨论 | 第59-63页 |
| 一、缝隙连接细胞间通讯与肿瘤的关系 | 第59-60页 |
| 二、相关实验方法技术原理简介 | 第60-61页 |
| 三、薯蓣皂苷对小鼠黑色素瘤缝隙连接功能的影响 | 第61-63页 |
| 第二部分 薯蓣皂苷对小鼠B16HSV-tk/GCV自杀基因治疗系统增效作用的研究 | 第63-70页 |
| 第一节 材料 | 第63-64页 |
| 第二节 方法 | 第64-65页 |
| 一、确定GCV浓度 | 第64页 |
| 二、确定TK比例 | 第64页 |
| 三、MTT法检测薯蓣皂苷对B16HSV-tk/GCV自杀基因治疗系统的增效作用 | 第64-65页 |
| 四、AnnexinV单染法检测细胞凋亡 | 第65页 |
| 五、统计学分析 | 第65页 |
| 第三节 结果 | 第65-68页 |
| 一、MTT法检测薯蓣皂苷对B16HSV-tk/GCV自杀基因治疗系统的增效作用 | 第65-66页 |
| 二、AnnexinV单染法检测细胞凋亡 | 第66-68页 |
| 第四节 讨论 | 第68-70页 |
| 第三部分 阻断缝隙连接功能对薯蓣皂苷在自杀基因治疗系统中增效作用的影响 | 第70-85页 |
| 第一节 材料 | 第70-71页 |
| 第二节 方法 | 第71-78页 |
| 一、RT-PCR扩增人Cx43读码框 | 第71-73页 |
| 二、慢病毒载体质粒pLVmCherry-Cx43的构建及鉴定 | 第73-75页 |
| 三、pLVmCherry-Cx43G21R和pLVmCherry-Cx43G138R基因定点突变慢病毒载体质粒的构建与鉴定 | 第75-76页 |
| 四、重组慢病毒的包装与转染 | 第76-77页 |
| 五、Western blot检测Cx43表达 | 第77页 |
| 六、荧光示踪法观察GJIC功能 | 第77页 |
| 七、MTT法检测过表达野生型及突变型Cx43细胞株对B16HSV-tk/GCV自杀基因治疗系统的影响 | 第77-78页 |
| 第三节 结果 | 第78-82页 |
| 一、构建过表达野生型Cx43、突变型Cx43G21R、突变型Cx43G138R的B16细胞株 | 第78-80页 |
| 二、Western Blot检测Cx43蛋白表达 | 第80页 |
| 三、荧光示踪检测Cx43功能 | 第80-81页 |
| 四、薯蓣皂苷对过表达野生型Cx43及突变型Cx43G21R、突变型Cx43G138R的B16细胞株自杀基因治疗系统的影响 | 第81-82页 |
| 第四节 讨论 | 第82-85页 |
| 一、过表达及Cx43基因的选择 | 第83页 |
| 二、主要病毒载体的优缺点 | 第83页 |
| 三、本次实验的结果 | 第83-85页 |
| 结语 | 第85-87页 |
| 参考文献 | 第87-97页 |
| 附录 | 第97-99页 |
| 致谢 | 第99-100页 |
| 附件 | 第100-101页 |
| 详细摘要 | 第101-113页 |
