| 摘要 | 第3-6页 |
| Abstract | 第6-9页 |
| 英文缩略词一览表 | 第13-15页 |
| 第1章 前言 | 第15-27页 |
| 1.1 肝癌及肝癌研究现状 | 第15-17页 |
| 1.1.1 肝癌的发生及发病率 | 第15-16页 |
| 1.1.2 肝癌的诊断、治疗 | 第16-17页 |
| 1.2 阿霉素脂质体研究现状 | 第17-21页 |
| 1.2.1 阿霉素简介 | 第17-18页 |
| 1.2.2 脂质体简介 | 第18-19页 |
| 1.2.3 脂质体的分类 | 第19页 |
| 1.2.4 阿霉素脂质体及应用 | 第19-21页 |
| 1.3 靶向多肽的研究现状 | 第21-22页 |
| 1.3.1 多肽作为靶向配体 | 第21页 |
| 1.3.2 肝癌多肽研究现状 | 第21-22页 |
| 1.4 肿瘤的多药耐药性(MDR) | 第22-25页 |
| 1.4.1 MDR研究现状 | 第22-23页 |
| 1.4.2 MDR逆转研究现状 | 第23页 |
| 1.4.3 双功能脂质体 | 第23-25页 |
| 1.5 脂质体特性研究现状 | 第25-27页 |
| 1.5.1 脂质体的制备技术 | 第25-26页 |
| 1.5.2 脂质体的检测方法 | 第26-27页 |
| 第2章 本课题的立项依据、创新之处及技术路线 | 第27-31页 |
| 立项依据 | 第27-28页 |
| 创新之处 | 第28页 |
| 本研究的技术路线如下 | 第28-31页 |
| 第3章 miRNA质粒表达载体的构建与鉴定 | 第31-43页 |
| 3.1 实验材料、试剂与仪器 | 第31-33页 |
| 3.1.1 实验材料 | 第31页 |
| 3.1.2 实验试剂 | 第31-32页 |
| 3.1.3 主要仪器设备 | 第32页 |
| 3.1.4 试剂的配制 | 第32-33页 |
| 3.2 实验方法 | 第33-37页 |
| 3.2.1 miRNA序列确定和载体的选取 | 第33-34页 |
| 3.2.2 pcDNA6.2-GW质粒载体小量制备 | 第34-35页 |
| 3.2.3 质粒的浓度与纯度测定 | 第35页 |
| 3.2.4 pcDNA6.2-GW质粒载体胶纯化回收 | 第35-36页 |
| 3.2.5 pre-miRNA的退火 | 第36页 |
| 3.2.6 pcDNA6.2-GW/miRNA质粒的构建 | 第36-37页 |
| 3.2.7 阳性克隆的制备和鉴定 | 第37页 |
| 3.2.8 pcDNA6.2-GW/miRNA质粒小量制备(去内毒素) | 第37页 |
| 3.3 实验结果 | 第37-40页 |
| 3.3.1 pcDNA6.2-GW质粒胶纯化回收检测和合成片段退火检测 | 第37-39页 |
| 3.3.2 阳性克隆的制备和鉴定 | 第39-40页 |
| 3.4 讨论 | 第40-43页 |
| 第4章 HCSP4-Lipo-miRNA-DOX体系的制备及鉴定 | 第43-57页 |
| 4.1 实验材料、试剂与仪器 | 第43-45页 |
| 4.1.1 实验材料 | 第43页 |
| 4.1.2 实验试剂 | 第43-44页 |
| 4.1.3 主要仪器设备 | 第44-45页 |
| 4.1.4 试剂的配制 | 第45页 |
| 4.2 实验方法 | 第45-51页 |
| 4.2.1 HCSP4-Lipo-DOX脂质体的制备 | 第45-46页 |
| 4.2.2 HCSP4-Lipo-miRNA-DOX体系的制备 | 第46-47页 |
| 4.2.3 HCSP4-Lipo脂质体的制备 | 第47-48页 |
| 4.2.4 HCSP4-Lipo-miRNA-DOX体系的粒径、分散系数、包封率检测 | 第48页 |
| 4.2.5 HCSP4-Lipo-miRNA-DOX体系的微结构观察 | 第48-49页 |
| 4.2.6 细胞培养 | 第49-50页 |
| 4.2.7 HCSP4-Lipo-miRNA-DOX体系的细胞转染及条件优化 | 第50-51页 |
| 4.2.8 HCSP4-Lipo-miRNA-DOX体系的靶向性检测 | 第51页 |
| 4.3 实验结果 | 第51-55页 |
| 4.3.1 HCSP4-Lipo-miRNA-DOX体系的特性检测 | 第51-53页 |
| 4.3.2 HCSP4-Lipo-miRNA-DOX体系的转染条件的优化 | 第53页 |
| 4.3.3 HCSP4-Lipo-miRNA-DOX体系的转染效率评估 | 第53-54页 |
| 4.3.4 HCSP4-Lipo-miRNA-DOX体系的靶向性检测 | 第54-55页 |
| 4.4 讨论 | 第55-57页 |
| 第5章 HCSP4-Lipo-miRNA-DOX体系对人肝癌细胞、DOX耐受性肝癌细胞生物学效应 | 第57-71页 |
| 5.1 实验材料、试剂与仪器 | 第57-58页 |
| 5.1.1 实验材料 | 第57页 |
| 5.1.2 实验试剂 | 第57页 |
| 5.1.3 主要仪器设备 | 第57-58页 |
| 5.1.4 试剂的配制 | 第58页 |
| 5.2 实验方法 | 第58-62页 |
| 5.2.1 细胞培养与HCSP4-Lipo-miRNA-DOX制备(同第4章) | 第58页 |
| 5.2.2 细胞毒性检测 | 第58-59页 |
| 5.2.3 体外损伤修复法 | 第59页 |
| 5.2.4 细胞凋亡检测(DAPI染色) | 第59-60页 |
| 5.2.5 细胞骨架整体形态结构检测 | 第60-61页 |
| 5.2.6 细胞克隆形成实验 | 第61页 |
| 5.2.7 细胞周期检测 | 第61-62页 |
| 5.2.8 统计学处理 | 第62页 |
| 5.3 实验结果 | 第62-69页 |
| 5.3.1 HCSP4-Lipo-miRNA-DOX对HCC细胞毒性 | 第62-63页 |
| 5.3.2 HCSP4-Lipo-miRNA-DOX对HCC细胞运动能力的影响 | 第63-64页 |
| 5.3.3 HCSP4-Lipo-miRNA-DOX对HCC细胞凋亡的影响 | 第64-65页 |
| 5.3.4 HCSP4-Lipo-miRNA-DOX对细胞骨架整体形态结构影响 | 第65-67页 |
| 5.3.5 HCSP4-Lipo-miRNA-DOX对细胞增殖能力的影响 | 第67-68页 |
| 5.3.6 HCSP4-Lipo-miRNA-DOX对细胞周期的影响 | 第68-69页 |
| 5.4 讨论 | 第69-71页 |
| 总结与展望 | 第71-73页 |
| 参考文献 | 第73-87页 |
| 致谢 | 第87-89页 |
| 攻读硕士学位期间研究成果 | 第89页 |
