| 中文摘要 | 第9-11页 |
| Abstract | 第11-12页 |
| 1 前言 | 第13-27页 |
| 1.1 高温胁迫对植物的影响 | 第13-15页 |
| 1.1.1 高温对植物生长发育的影响 | 第13-14页 |
| 1.1.2 高温对植物生物膜的影响 | 第14页 |
| 1.1.3 高温对植物生理代谢的影响 | 第14-15页 |
| 1.2 低温胁迫对植物的影响 | 第15-18页 |
| 1.2.1 低温对植物生物膜的影响 | 第15页 |
| 1.2.2 低温下参与信号传递的转录因子 | 第15-18页 |
| 1.2.3 低温对植物光合作用的影响 | 第18页 |
| 1.3 低温冷驯化蛋白-COR413蛋白家族 | 第18-23页 |
| 1.3.1 COR413蛋白的分类和组织特异性 | 第19-20页 |
| 1.3.2 COR413蛋白在各物种中的表达情况 | 第20页 |
| 1.3.3 COR413蛋白的结构 | 第20-21页 |
| 1.3.4 COR413蛋白的功能预测 | 第21-23页 |
| 1.4 Solexa测序 | 第23-25页 |
| 1.4.1 Solexa测序的基本原理 | 第23-24页 |
| 1.4.2 Solexa测序的实验流程 | 第24-25页 |
| 1.4.3 Solexa测序的应用 | 第25页 |
| 1.5 本研究的目的、意义 | 第25-27页 |
| 2 材料与方法 | 第27-39页 |
| 2.1 实验材料 | 第27-28页 |
| 2.1.1 植物材料 | 第27页 |
| 2.1.2 菌株与质粒 | 第27页 |
| 2.1.3 酶及生化试剂 | 第27页 |
| 2.1.4 PCR引物 | 第27-28页 |
| 2.2 实验方法 | 第28-39页 |
| 2.2.1 总RNA的提取 | 第28页 |
| 2.2.2 反转录cDNA第一条链的合成 | 第28-29页 |
| 2.2.3 PCR扩增 | 第29-30页 |
| 2.2.4 Quantitative real-time PCR体系及反应条件 | 第30页 |
| 2.2.5 真核表达载体的构建 | 第30-34页 |
| 2.2.5.1 正义表达载体的构建 | 第30页 |
| 2.2.5.2 连接 | 第30-31页 |
| 2.2.5.3 大肠杆菌感受态细胞的制备 | 第31页 |
| 2.2.5.4 大肠杆菌细胞的转化及克隆筛选 | 第31页 |
| 2.2.5.5 大肠杆菌中质粒的提取 | 第31-32页 |
| 2.2.5.6 质粒DNA的酶切鉴定 | 第32页 |
| 2.2.5.7 回收 | 第32-33页 |
| 2.2.5.8 DNA序列测定 | 第33页 |
| 2.2.5.9 根癌农杆菌LBA4404感受态细胞的制备与转化 | 第33页 |
| 2.2.5.10 利用农杆菌介导转化烟草 | 第33-34页 |
| 2.2.6 植物基因组DNA、RNA的提取 | 第34-36页 |
| 2.2.6.1 CTAB微量法提取基因组DNA | 第34-35页 |
| 2.2.6.2 转基因植株的PCR筛选 | 第35-36页 |
| 2.2.7 qRT-PCR | 第36-37页 |
| 2.2.7.1 qRT-PCR引物设计 | 第36页 |
| 2.2.7.2 qRT-PCR反应条件 | 第36-37页 |
| 2.2.8 转基因烟草生理指标的测定 | 第37-39页 |
| 2.2.8.1 快速叶绿素荧光诱导曲线的测定 | 第37页 |
| 2.2.8.2 DAB和NBT染色分析 | 第37页 |
| 2.2.8.3 低温处理植株生长量测定 | 第37-38页 |
| 2.2.8.4 叶片相对电导率的测定 | 第38-39页 |
| 3 结果与分析 | 第39-66页 |
| 3.1 番茄幼苗的表达谱分析 | 第39-55页 |
| 3.1.1 Solexa测序结果的获得 | 第39页 |
| 3.1.2 Solexa测序结果的分析 | 第39-40页 |
| 3.1.3 Solexa标签的基因定位 | 第40-41页 |
| 3.1.4 Solexa测序库的差异基因的表达分析 | 第41-42页 |
| 3.1.5 Solexa测序库的差异表达显著基因的GO分类 | 第42-43页 |
| 3.1.6 Solexa测序库的差异表达基因的筛选 | 第43-55页 |
| 3.2 LeCOR413-TM1基因的分离 | 第55页 |
| 3.3 LeCOR413-TM1基因的序列分析 | 第55-57页 |
| 3.3.1 LeCOR413-TM1全长cDNA分析 | 第55页 |
| 3.3.2 LeCOR413-TM1编码蛋白质序列分析 | 第55-57页 |
| 3.4 LeCOR413-TM1的亚细胞定位 | 第57-58页 |
| 3.5 LeCOR413-TM1基因在番茄中的表达分析 | 第58-59页 |
| 3.6 LeCOR413-TM1基因在烟草中的遗传转化,鉴定和筛选 | 第59-61页 |
| 3.6.1 PBI正义表达载体的构建 | 第59页 |
| 3.6.2 转LeCOR413-TM1基因植株的转化和鉴定 | 第59-61页 |
| 3.6.3 转LeCOR413-TM1基因植株的筛选 | 第61页 |
| 3.7 LeCOR413-TM1基因的过量表达提高了烟草的抗冷能力 | 第61-66页 |
| 3.7.1 过表达LeCOR413-TM1对低温胁迫下种子萌发的影响 | 第61-62页 |
| 3.7.2 过表达LeCOR413-TM1对低温胁迫下成苗的影响 | 第62-63页 |
| 3.7.3 过表达LeCOR413-TM1对低温胁迫下H_2O_2和O_2~(·-)量的影响 | 第63页 |
| 3.7.4 过表达LeCOR413-TM1减轻了烟草在低温条件下的PSII光抑制程度 | 第63-64页 |
| 3.7.5 过表达LeCOR413-TM1对低温胁迫下膜透性的影响 | 第64-66页 |
| 4 讨论 | 第66-69页 |
| 5 结论 | 第69-70页 |
| 参考文献 | 第70-78页 |
| 致谢 | 第78-79页 |
| 攻读学位期间发表论文情况 | 第79页 |
