| 摘要 | 第4-5页 |
| Abstract | 第5页 |
| 1.前言 | 第9-17页 |
| 1.1 卤虫的研究概况 | 第9-10页 |
| 1.1.1 卤虫的形态与生物学特征 | 第9页 |
| 1.1.2 卤虫的经济价值 | 第9-10页 |
| 1.2 膜联蛋白(Annexin) | 第10-16页 |
| 1.2.1 膜联蛋白家族研究现状 | 第10页 |
| 1.2.2 膜联蛋白家族的结构特征 | 第10-14页 |
| 1.2.3 膜联蛋白家族各成员的功能 | 第14-15页 |
| 1.2.4 ANX3的结构特点 | 第15页 |
| 1.2.5 ANX3的功能 | 第15-16页 |
| 1.2.6 As-ANX3上下游调控蛋白 | 第16页 |
| 1.3 本研究的目的及意义 | 第16-17页 |
| 2.材料与方法 | 第17-30页 |
| 2.1 材料 | 第17-22页 |
| 2.1.1 卤虫的孵化及培养 | 第17页 |
| 2.1.2 主要药品及试剂 | 第17-21页 |
| 2.1.3 主要仪器 | 第21-22页 |
| 2.2 方法 | 第22-30页 |
| 2.2.1 卤虫总RNA的提取 | 第22页 |
| 2.2.2 cDNA合成反应 | 第22-23页 |
| 2.2.3 基因克隆 | 第23-26页 |
| 2.2.4 As-ANX3亚细胞定位分析 | 第26页 |
| 2.2.5 Real-timeqPCR | 第26-27页 |
| 2.2.6 As-ANX3蛋白的原核表达 | 第27页 |
| 2.2.7 As-ANX3重组蛋白的大量诱导及纯化 | 第27-28页 |
| 2.2.8 免疫印迹实验 | 第28-29页 |
| 2.2.9 RNA干扰 | 第29页 |
| 2.2.10 As-anx3的生物信息学与统计学分析 | 第29-30页 |
| 3.结果 | 第30-48页 |
| 3.1 基因全长的克隆 | 第30-33页 |
| 3.1.1 As-anx3基因EST片段的获得 | 第30页 |
| 3.1.2 As-anx3基因3’片段的获得 | 第30-31页 |
| 3.1.3 5 ’端序列获得 | 第31页 |
| 3.1.4 As-anx3基因全长序列 | 第31-33页 |
| 3.2 生物信息学分析 | 第33-36页 |
| 3.3 序列进化关系分析 | 第36-38页 |
| 3.4 As-anx3表达模式 | 第38-42页 |
| 3.4.1 As-ANX3亚细胞定位分析 | 第38-40页 |
| 3.4.2 As-anx3的表达水平分析 | 第40-42页 |
| 3.5 蛋白的表达及纯化 | 第42-44页 |
| 3.5.1 As-ANX3蛋白的表达 | 第42页 |
| 3.5.2 As-ANX3蛋白的可溶性检测 | 第42-44页 |
| 3.6 WB分析As-ANX蛋白的表达模式 | 第44-46页 |
| 3.6.1 卤虫不同发育阶段As-ANX3蛋白的表达 | 第44页 |
| 3.6.2 温度胁迫下As-ANX3蛋白的表达 | 第44-46页 |
| 3.7 中国卤虫胚胎发育期As-anx3小RNA干扰 | 第46-48页 |
| 4.讨论 | 第48-51页 |
| 4.1 中国卤虫As-anx3基因全长及进化特征 | 第48页 |
| 4.2 As-ANX3的亚细胞定位分析 | 第48页 |
| 4.3 As-anx3在不同发育时期的表达水平 | 第48-49页 |
| 4.4 温度和盐胁迫条件下As-anx3的表达水平 | 第49页 |
| 4.5 As-ANX3在滞育胚胎重启过程中的作用 | 第49-50页 |
| 4.6 中国卤虫胚胎发育时期As-anx3的作用 | 第50-51页 |
| 结论 | 第51-52页 |
| 参考文献 | 第52-57页 |
| 致谢 | 第57页 |
