中文摘要 | 第1-10页 |
英文摘要 | 第10-13页 |
第一部分 文献综述 | 第13-31页 |
1、耐盐模式植物盐芥(Thellungiella halophila )的相关情况概述 | 第13-18页 |
2、构建突变体库的意义和方法 | 第18-29页 |
·构建突变体库的意义 | 第18页 |
·构建突变库的方法 | 第18-29页 |
·自发突变 | 第18-19页 |
·理化诱变 | 第19-20页 |
·插入突变 | 第20-29页 |
·T-DNA 插入法 | 第20-26页 |
·T-DNA 标签的原理概述 | 第21-22页 |
·T-DNA 插入构建突变库的方法 | 第22-26页 |
·基因敲除 | 第22-23页 |
·T-DNA 介导的基因捕获技术 | 第23-24页 |
·激活标签技术 | 第24-26页 |
·转座子标签法 | 第26-29页 |
·获得插入位点侧翼序列的方法 | 第29页 |
3、生物信息学概述 | 第29-30页 |
4、本研究的意义 | 第30-31页 |
第二部分 实验论文 | 第31-59页 |
第一章 盐芥激活标签突变体库的建立 | 第31-49页 |
1. 实验材料及仪器 | 第31-33页 |
·植物材料 | 第31页 |
·菌种及质粒 | 第31页 |
·酶及化学试剂 | 第31-32页 |
·主要仪器设备 | 第32页 |
·培养基 | 第32-33页 |
·软件 | 第33页 |
2. 实验方法 | 第33-40页 |
·盐芥的转化(花浸染法) | 第33-34页 |
·浸染用盐芥的准备 | 第33页 |
·转化用农杆菌的准备 | 第33-34页 |
·四个串联增强子的PCR 检测 | 第33-34页 |
·转化用农杆菌菌液的制备 | 第34页 |
·Floral dip 法转化盐芥 | 第34页 |
·basta 抗性苗的筛选 | 第34页 |
·CTAB 法微量提取DNA | 第34-35页 |
·basta 抗性苗的PCR 检测 | 第35-36页 |
·侧翼序列的获得 | 第36-37页 |
·TAIL-PCR 法扩增侧翼序列 | 第36-37页 |
·引物设计 | 第36页 |
·TAIL-PCR 反应体系 | 第36-37页 |
·TAIL-PCR 反应程序 | 第37页 |
·GeneClean 方法从琼脂糖凝胶上回收DNA 片段 | 第37-38页 |
·PCR 产物与T-载体的连接 | 第38页 |
·大肠杆菌DH108 感受态细胞的制备和转化 | 第38-39页 |
·质粒的提取及酶切验证 | 第39-40页 |
·PCR 产物测序及序列分析 | 第40页 |
·激活标记突变体种子的收获与保存 | 第40页 |
3. 实验结果及分析 | 第40-49页 |
·激活标记载体四个串联增强子的PCR 检测 | 第40-41页 |
·盐芥的萌发与春化 | 第41-42页 |
·Basta 抗性苗的获得 | 第42页 |
·Basta 抗性苗DNA 提取 | 第42-43页 |
·Basta 抗性苗的PCR 检测结果 | 第43页 |
·侧翼序列的获得和分析 | 第43-49页 |
第二章 盐芥转座子标签突变体的筛选 | 第49-55页 |
1. 实验材料及仪器 | 第49页 |
·植物材料 | 第49页 |
·菌种及质粒 | 第49页 |
·酶及化学试剂 | 第49页 |
·主要仪器设备 | 第49页 |
2. 实验方法 | 第49-52页 |
·质粒提取 | 第49-50页 |
·质粒的农杆菌转化 | 第50页 |
·转化用农杆菌菌液的制备 | 第50页 |
·花浸染法转化盐芥 | 第50-51页 |
·抗性苗的筛选 | 第51页 |
·CTAB 微量法提取抗性苗基因组DNA | 第51页 |
·抗性苗的检测与分子鉴定 | 第51-52页 |
·Ds 转基因苗的PCR 检测 | 第51-52页 |
·Bar 基因的PCR 检测 | 第51-52页 |
·GUS 基因的PCR 检测 | 第52页 |
3 结果分析 | 第52-55页 |
·转基因苗的获得 | 第52-53页 |
·Ds 转基因苗的获得 | 第53页 |
·抗性苗基因组DNA 的提取 | 第53-54页 |
·抗性苗的PCR 检测 | 第54-55页 |
·Ds 转基因苗的PCR 检测 | 第54-55页 |
·Bar 基因的PCR 检测 | 第54页 |
·GUS 基因的PCR 检测 | 第54-55页 |
第三章 讨论 | 第55-59页 |
1. 转化用盐芥的准备 | 第55页 |
2. 盐芥的转化效率 | 第55-56页 |
3. 侧翼序列的获得 | 第56-57页 |
4. T-DNA 标签技术和转座子标签技术的比较 | 第57页 |
5. 以后的工作 | 第57-59页 |
参考文献 | 第59-64页 |
附录 | 第64-65页 |
致谢 | 第65-66页 |
攻读硕士学位期间发表的学术论著 | 第66页 |