| CONTENTS | 第5-8页 |
| 摘要 | 第8-10页 |
| Abstract | 第10-11页 |
| 1 前言 | 第12-18页 |
| 1.1 miRNAs的研究进展 | 第12-16页 |
| 1.1.1 miRNAs的发现 | 第12页 |
| 1.1.2 miRNAs调节作用的分子机理 | 第12-13页 |
| 1.1.3 miRNAs的检测方法 | 第13-14页 |
| 1.1.4 miRNAs的应用 | 第14-16页 |
| 1.2 miR-152的研究进展 | 第16-17页 |
| 1.3 甲基转移酶1的研究进展 | 第17页 |
| 1.4 研究的目的和意义 | 第17-18页 |
| 2 材料与方法 | 第18-35页 |
| 2.1 实验材料 | 第18页 |
| 2.2 主要仪器和设备 | 第18-19页 |
| 2.3 实验试剂 | 第19-20页 |
| 2.4 试剂的配制 | 第20-21页 |
| 2.5 实验方法与步骤 | 第21-35页 |
| 2.5.1 miR-152靶基因的预测 | 第21-22页 |
| 2.5.2 miR-152及其靶基因在不同乳品质奶牛乳腺组织中的表达状况 | 第22-24页 |
| 2.5.3 不同乳品质奶牛乳腺组织中DNMT1蛋白的表达 | 第24-25页 |
| 2.5.4 奶牛乳腺上皮细胞培养和鉴定 | 第25-26页 |
| 2.5.5 miR-152靶基因的验证 | 第26-30页 |
| 2.5.6 miR-152 mimics对奶牛乳腺上皮细胞的影响 | 第30-33页 |
| 2.5.7 miR-152 inhibitor对奶牛乳腺细胞上皮的影响 | 第33-34页 |
| 2.5.8 数据处理 | 第34-35页 |
| 3 结果与分析 | 第35-55页 |
| 3.1 miR-152、Dnmt1在不同乳品质乳腺组织中的表达 | 第35-38页 |
| 3.1.1 不同品质奶牛乳腺组织总RNA质量检测 | 第35页 |
| 3.1.2 miR-152、Dnmt1在不同品质乳腺组织中的表达 | 第35-36页 |
| 3.1.3 DNMT1蛋白在不同品质乳腺组织中的表达 | 第36-38页 |
| 3.2 奶牛乳腺上皮细胞的培养和鉴定 | 第38页 |
| 3.3 HEK-293细胞的培养 | 第38-39页 |
| 3.4 miR-152的靶基因Dnmt1构建及鉴定 | 第39-41页 |
| 3.4.1 miR-152靶基因的预测结果 | 第39页 |
| 3.4.2 报告基因载体的构建和鉴定 | 第39-40页 |
| 3.4.3 荧光素酶活性测定 | 第40-41页 |
| 3.5 miR-152基因过表达对奶牛乳腺上皮细胞的影响 | 第41-48页 |
| 3.5.1 qRT-PCR方法检测miR-152 mimics转染后奶牛乳腺上皮细胞中miR-152、Dnmt1及泌乳信号通路基因的表达 | 第41-43页 |
| 3.5.2 miR-152 mimics对DNMT1及泌乳信号通路蛋白表达的影响 | 第43-44页 |
| 3.5.3 miR-152 mimics对奶牛乳腺上皮细胞基因组DNA甲基化水平和甲基化酶活性的影响 | 第44-45页 |
| 3.5.4 miR-152 mimics对奶牛乳腺上皮细胞增殖能力及活性的影响 | 第45-46页 |
| 3.5.5 miR-152 mimics对奶牛乳腺上皮细胞周期的影响 | 第46页 |
| 3.5.6 miR-152 mimics对奶牛乳腺上皮细胞分泌β-酪蛋白、甘油三酯和乳糖能力的测定 | 第46-48页 |
| 3.6 miR-152基因沉寂对奶牛乳腺上皮细胞的影响 | 第48-55页 |
| 3.6.1 qRT-PCR方法检测miR-152 inhibitor转染后奶牛乳腺上皮细胞中miR-152、Dnmt1及泌乳信号通路基因的表达 | 第48-50页 |
| 3.6.2 miR-152 inhibitor对DNMT1及泌乳信号通路蛋白表达的影响 | 第50页 |
| 3.6.3 miR-152 inhibitor对奶牛乳腺上皮细胞基因组DNA甲基化水平和甲基化酶活性的影响 | 第50-52页 |
| 3.6.4 miR-152 inhibitor对奶牛乳腺上皮细胞增殖能力及活性的影响 | 第52-53页 |
| 3.6.5 miR-152 inhibitor对奶牛乳腺上皮细胞周期的影响 | 第53页 |
| 3.6.6 miR-152 inhibitor对奶牛乳腺上皮细胞分泌β-酪蛋白、甘油三酯和乳糖能力的测定 | 第53-55页 |
| 4 讨论 | 第55-59页 |
| 4.1 miR-152在不同乳品质奶牛乳腺组织中的表达 | 第55页 |
| 4.2 miR-152靶基因的预测以及验证 | 第55-56页 |
| 4.3 miR-152对奶牛乳腺上皮细胞泌乳功能及相关信号通路基因的调节作用 | 第56-57页 |
| 4.4 miR-152对基因甲基化水平的调节作用 | 第57-58页 |
| 4.5 miR-152对奶牛乳腺上皮细胞增殖和周期的影响 | 第58-59页 |
| 5 结论 | 第59-60页 |
| 致谢 | 第60-61页 |
| 参考文献 | 第61-68页 |
| 附录 | 第68-69页 |
| 攻读硕士学位期间发表学术论文 | 第69页 |
