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苹果α-法尼烯合成酶基因转化番茄研究

摘要第1-9页
Abstract第9-11页
1. 引言第11-24页
   ·α-法尼烯的代谢途径及其生物学功能第11-17页
     ·α-法尼烯的代谢途径第11-14页
     ·α-法尼烯的生物学功能第14-17页
   ·农杆菌介导的番茄遗传转化的研究进展第17-21页
     ·番茄基因转化的方法及供受体系统第17-18页
     ·影响番茄叶片高效再生的因素第18-20页
     ·影响转化的因素第20-21页
   ·存在的问题及对策第21-22页
     ·外源基因的表达强度不够,难以达到理想效果第21页
     ·转化的目的基因有限第21页
     ·对转化植株的选择不够重视第21-22页
     ·再生和转化的受体系统单一第22页
   ·研究目的意义及前景展望第22-24页
     ·研究目的意义第22-23页
     ·前景展望第23-24页
2 材料与方法第24-44页
   ·实验材料第24-25页
     ·菌株与质粒第24页
     ·酶及生化试剂第24页
     ·PCR 引物第24-25页
   ·实验方法第25-44页
     ·Trizol 法提取苹果总RNA第25页
     ·RNA 反转录第25-26页
     ·苹果α-法尼烯合成酶表达载体的构建第26-30页
     ·番茄子叶高效再生体系的建立第30-31页
     ·农杆菌介导的番茄离体子叶遗传转化体系的建立第31-33页
     ·PCR 检测转基因植株第33-34页
     ·转基因植株表达量分析第34-35页
     ·转基因植株的Western 检测第35-40页
     ·转基因番茄抗高温指标测定第40-41页
     ·利用原生质体进行的亚细胞定位第41-43页
     ·叶片和果实中挥发物的测定第43-44页
3 结果与分析第44-63页
   ·正义表达载体的构建第44-45页
   ·番茄子叶高效再生及遗传转化体系的优化第45-49页
     ·不同激素组合对番茄子叶愈伤组织及芽形成的影响第45-46页
     ·不同浓度生长素对生根的影响第46-47页
     ·卡那霉素选择压的确定第47-48页
     ·头孢霉素(Cef)对子叶再生的影响第48-49页
     ·农杆菌侵染时间的确定第49页
   ·转基因植株的检测及基因的表达分析第49-53页
     ·AFS 基因转化番茄及转基因植株的PCR 检测第49-50页
     ·转基因植株AFS 基因表达分析第50-51页
     ·转基因植株western 的检测第51-53页
   ·高温对转AFS 基因番茄的影响第53-57页
     ·转AFS 基因番茄光合速率对温度的响应第53页
     ·高温胁迫下转AFS 基因番茄净光合速率的变化第53-54页
     ·高温处理后转基因番茄和野生型番茄最大光化学效率的变化第54-55页
     ·高温胁迫下转AFS 基因过表达对番茄叶片中MDA 含量的影响第55-56页
     ·高温胁迫下转基因番茄相对电导率的测定第56-57页
   ·转AFS 基因对番茄叶片中叶绿素和类胡萝卜素的含量影响第57页
   ·α–法尼烯合成酶亚细胞定位的研究第57-60页
     ·pBI-AFS-GFP 亚细胞定位表达载体的构建第57-59页
     ·融合蛋白荧光信号的检测第59-60页
   ·果实及叶片中挥发物的测定第60-63页
4 讨论第63-68页
   ·番茄再生及遗传转化第63-64页
   ·AFS 基因在转基因番茄中的表达分析第64页
   ·α-法尼烯合成酶的亚细胞定位与α-法尼烯的释放第64-66页
   ·转基因植株的生理特性第66-68页
5 结论第68-69页
参考文献第69-81页
附录:常用溶液的配制第81-82页
致谢第82-83页
攻读学位期间发表论文情况第83页

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