| 摘要 | 第1-4页 |
| ABSTRACT | 第4-9页 |
| 引言 | 第9-11页 |
| 第一部分 n-3多不饱和脂肪酸饮食对小鼠肥胖的影响 | 第11-19页 |
| 第一部分 第一章 实验材料 | 第11-13页 |
| ·实验器材 | 第11页 |
| ·实验动物 | 第11页 |
| ·饲料配方 | 第11-12页 |
| ·样本和试剂 | 第12页 |
| ·常用软件 | 第12-13页 |
| 第一部分 第二章 实验方法 | 第13-14页 |
| ·小鼠每周体重和进食量的测定 | 第13页 |
| ·细胞因子检测 | 第13页 |
| ·数据统计 | 第13-14页 |
| 第一部分 第三章 实验结果 | 第14-16页 |
| ·三组小鼠每周增重、每周进食量及体重体长比的差异 | 第14-15页 |
| ·三种细胞因子血清水平与饮食类型的关系 | 第15-16页 |
| 第一部分 第四章 实验讨论 | 第16-18页 |
| 第一部分 结论 | 第18-19页 |
| 第二部分 fat-1转基因小鼠打靶载体的构建 | 第19-41页 |
| 第二部分 第一章 实验材料 | 第19-21页 |
| ·实验器材 | 第19页 |
| ·试剂及基因工程酶类 | 第19-20页 |
| ·质粒、菌种、引物合成、测序及基因合成 | 第20页 |
| ·组织样本 | 第20页 |
| ·常用软件及数据库 | 第20-21页 |
| 第二部分 第二章 实验方法 | 第21-31页 |
| ·中间载体pSSC-10的构建 | 第21-24页 |
| ·构建策略 | 第21页 |
| ·多克隆位点序列的合成 | 第21-22页 |
| ·通用载体pSSC-9的酶切 | 第22页 |
| ·酶切载体pSSC-9后的凝胶回收 | 第22页 |
| ·酶切后的载体pSSC-9和添加的MCS连接 | 第22-23页 |
| ·感受态细胞的制备和重组质粒的转化 | 第23页 |
| ·阳性克隆的筛选 | 第23-24页 |
| ·中间载体pCMV-fat-1的构建 | 第24-26页 |
| ·构建策略 | 第24-25页 |
| ·含有fat-1基因的克隆载体pMD18-T Vector和pEGFP-N1的双酶切 | 第25页 |
| ·分别将凝胶电泳分离的fat-1基因和pEGFP-N1片段进行凝胶回收 | 第25页 |
| ·酶切的fat-1基因和pEGFP-N1片段的连接 | 第25页 |
| ·重组质粒的转化 | 第25页 |
| ·阳性克隆的筛选 | 第25页 |
| ·引入LoxP位点和BamHI位点 | 第25-26页 |
| ·基因敲入载体pSSC-10-fat-1-SA-LA的构建 | 第26-31页 |
| ·构建策略 | 第26-27页 |
| ·中间载体pSSC-10和pCMV-fat-1的双酶切 | 第27页 |
| ·分别将凝胶电泳分离的pSSC-10和pCMV-fat-1片段进行凝胶回收 | 第27页 |
| ·酶切的pSSC-10和pCMV-fat-1片段的连接 | 第27页 |
| ·重组质粒的转化 | 第27页 |
| ·阳性克隆的筛选 | 第27页 |
| ·小鼠基因组DNA的提取 | 第27页 |
| ·钓取同源臂所用引物的设计 | 第27-28页 |
| ·用PCR法钓取同源短臂 | 第28-29页 |
| ·PCR产物的纯化 | 第29页 |
| ·将纯化后的同源短臂连接至TA克隆载体 | 第29页 |
| ·重组质粒的转化 | 第29-30页 |
| ·阳性克隆的筛选 | 第30页 |
| ·中间载体pSSC-10-fat-1和pMD19-SA的双酶切 | 第30页 |
| ·分别将凝胶电泳分离的pSSC-10-fat-1和同源短臂片段进行凝胶回收 | 第30页 |
| ·重组质粒的转化 | 第30页 |
| ·阳性克隆的筛选 | 第30页 |
| ·同源长臂的钓取、TA克隆、连接 | 第30-31页 |
| 第二部分 第三章 实验结果 | 第31-36页 |
| ·中间载体pSSC-10的酶切鉴定和测序鉴定 | 第31页 |
| ·中间载体pCMV-fat-1的酶切鉴定和测序鉴定 | 第31-32页 |
| ·打靶载体pSSC-10-fat-1-SA-LA的酶切鉴定和测序鉴定 | 第32-36页 |
| ·中间载体pSSC-10-fat-1的鉴定 | 第32-33页 |
| ·中间载体pSSC-1O-fat-1-SA的鉴定 | 第33-34页 |
| ·打靶载体pSSC-10-fat-1-SA-LA的鉴定 | 第34-36页 |
| 第二部分 第四章 讨论 | 第36-40页 |
| ·提高中靶胚胎干细胞的筛选效率 | 第36页 |
| ·增强fat-1基因在真核细胞中的表达 | 第36-37页 |
| ·获得中靶干细胞后,在细胞水平剔除Neo抗性标记 | 第37-38页 |
| ·fat-1基因的预期的生理效应 | 第38-40页 |
| 第二部分 结论 | 第40-41页 |
| 参考文献 | 第41-43页 |
| 综述 | 第43-50页 |
| 参考文献 | 第48-50页 |
| 攻读学位期间的研究成果 | 第50-51页 |
| 致谢 | 第51-52页 |
