| 摘要 | 第4-6页 |
| Abstract | 第6-8页 |
| 缩略词表 | 第12-13页 |
| 第一章 文献综述 | 第13-24页 |
| 1 油橄榄简介 | 第13-14页 |
| 2 高等植物中乙烯的研究进展 | 第14-19页 |
| 2.1 乙烯对植物的生理作用 | 第14-16页 |
| 2.1.1 乙烯对种子萌发的影响 | 第14-15页 |
| 2.1.2 乙烯对植物生长发育的影响 | 第15页 |
| 2.1.3 乙烯对植物器官脱落的影响 | 第15页 |
| 2.1.4 乙烯在植物逆境胁迫反应中的响应 | 第15-16页 |
| 2.2 乙烯的生物合成过程 | 第16-17页 |
| 2.3 ACS的研究进展 | 第17-18页 |
| 2.4 ACO的研究进展 | 第18-19页 |
| 3 基因克隆技术 | 第19-21页 |
| 3.1 RACE技术 | 第19-20页 |
| 3.2 FPNI-PCR技术 | 第20-21页 |
| 4 GC-MS分析 | 第21-22页 |
| 5 大肠杆菌表达系统 | 第22页 |
| 6 研究目的及意义 | 第22-24页 |
| 第二章 油橄榄OeACS和DeACO基因的克隆及序列分析 | 第24-56页 |
| 1 材料与仪器 | 第24-25页 |
| 1.1 油橄榄果实 | 第24页 |
| 1.2 主要仪器 | 第24-25页 |
| 1.3 主要试剂和溶液 | 第25页 |
| 1.4 菌株和培养基 | 第25页 |
| 2 方法 | 第25-37页 |
| 2.1 油橄榄基因组DNA的提取 | 第25-26页 |
| 2.2 油橄榄总RNA的提取 | 第26-28页 |
| 2.3 油橄榄OeACS和OeACO的克隆 | 第28-37页 |
| 2.3.1 OeACS和OeACO克隆所用的引物 | 第28-29页 |
| 2.3.2 OeACS和OeACO cDNA 3'端未知序列的克隆及测序 | 第29-31页 |
| 2.3.3 OeACO cDNA 5'端未知序列的克隆及测序 | 第31-33页 |
| 2.3.4 OeACS DNA 5'端未知序列的克隆及测序 | 第33-35页 |
| 2.3.5 OeACS和OeACO DNA和cDNA序列的克隆及测序 | 第35-37页 |
| 3 OeACS和OeACO的生物信息学分析 | 第37-38页 |
| 4 结果与分析 | 第38-53页 |
| 4.1 油橄榄果实基因组DNA和总RNA的提取 | 第38-39页 |
| 4.2 OeACS的克隆及生物信息学分析 | 第39-45页 |
| 4.2.1 OeACS的克隆 | 第39-40页 |
| 4.2.2 OeACS核苷酸序列分析 | 第40-41页 |
| 4.2.3 OeACS的氨基酸序列分析 | 第41-42页 |
| 4.2.4 OeACS的二级结构和三级结构 | 第42-44页 |
| 4.2.5 ACS系统进化树的构建 | 第44-45页 |
| 4.3 OeACO的克隆和生物信息学分析 | 第45-53页 |
| 4.3.1 OeACO的克隆 | 第45-46页 |
| 4.3.2 OeACOs核苷酸序列分析 | 第46-48页 |
| 4.3.3 OeACOs的氨基酸序列分析 | 第48-50页 |
| 4.3.4 OeACOs的二级结构和高级结构的预测 | 第50-52页 |
| 4.3.5 ACO系统进化树的构建 | 第52-53页 |
| 5 讨论 | 第53-56页 |
| 5.1 OeACS和OeACO的结构 | 第54页 |
| 5.2 ACS与ACO之间的关系 | 第54-56页 |
| 第三章 OeACOs的原核表达及功能验证 | 第56-72页 |
| 1 材料和仪器 | 第56-57页 |
| 1.1 菌株和质粒 | 第56页 |
| 1.2 主要仪器 | 第56页 |
| 1.3 主要试剂和溶液 | 第56-57页 |
| 1.4 培养基 | 第57页 |
| 2 方法 | 第57-64页 |
| 2.1 OeACOs ORF序列的克隆 | 第57-58页 |
| 2.2 表达载体构建 | 第58-59页 |
| 2.2.1 酶切及回收 | 第58页 |
| 2.2.2 OeACO与线性pET-30b(+)的连接 | 第58-59页 |
| 2.2.3 阳性转化子的筛选与鉴定 | 第59页 |
| 2.3 pET-30b(+)-OeACO的原核表达 | 第59-60页 |
| 2.3.1 pET-30b(+)-OeACO转化大肠杆菌感受态细胞 | 第59-60页 |
| 2.3.2 阳性重组子的筛选与鉴定 | 第60页 |
| 2.4 pET-30b(+)-OeACO的原核表达及重组蛋白的检测和纯化 | 第60-62页 |
| 2.4.1 重组菌株的诱导表达 | 第60-61页 |
| 2.4.2 重组蛋白的SDS-PAGE检测 | 第61-62页 |
| 2.4.3 重组蛋白的分离纯化 | 第62页 |
| 2.5 蛋白定量 | 第62-63页 |
| 2.5.1 蛋白标准曲线的制作 | 第62-63页 |
| 2.5.2 酶液中蛋白的定量 | 第63页 |
| 2.6 重组OeACO酶活性的测定 | 第63-64页 |
| 2.6.1 样品制备 | 第63页 |
| 2.6.2 气相色谱和质谱条件 | 第63页 |
| 2.6.3 乙烯的定性和定量 | 第63-64页 |
| 3 结果与分析 | 第64-70页 |
| 3.1 OeACOs ORF的克隆和OeACOs-pMD19-T的双酶切 | 第64-65页 |
| 3.2 pET-30b(+)-OeACO重组表达质粒的构建 | 第65-66页 |
| 3.3 E.coli BL21/pET-30b(+)-OeACO阳性转化子的菌落PCR鉴定 | 第66页 |
| 3.4 重组菌诱导表达的时间优化 | 第66-68页 |
| 3.5 重组蛋白OeACOs酶活力的测定 | 第68-70页 |
| 3.5.1 蛋白含量的测定 | 第68-69页 |
| 3.5.2 重组蛋白的酶活力测定 | 第69-70页 |
| 4 讨论 | 第70-72页 |
| 4.1 重组质粒pET30b(+)-OeACO的构建 | 第70页 |
| 4.2 重组蛋白的诱导表达和功能验证 | 第70-72页 |
| 全文总结 | 第72-73页 |
| 参考文献 | 第73-80页 |
| 致谢 | 第80-81页 |
| 攻读硕士学位期间发表的论文 | 第81-82页 |
| 附录 | 第82-85页 |
