| 中文摘要 | 第6-7页 |
| ABSTRACT | 第7-8页 |
| 缩略语 | 第9-10页 |
| 1 前言 | 第10-19页 |
| 1.1 分枝杆菌whiB转录因子的研究进展 | 第10-17页 |
| 1.1.1 结核分枝杆菌转录调控研究概况 | 第10-11页 |
| 1.1.2 分枝杆菌的whiB家族基因 | 第11-15页 |
| 1.1.3 结核分枝杆菌whiB3的研究现状 | 第15-17页 |
| 1.2 结核分枝杆菌与耻垢分枝杆菌的关系 | 第17页 |
| 1.2.1 耻垢分枝杆菌与结核分枝杆菌的相似性 | 第17页 |
| 1.2.2 耻垢分枝杆菌的研究现状 | 第17页 |
| 1.3 本课题提出的背景及意义 | 第17-18页 |
| 1.4 本课题的内容及研究目标 | 第18-19页 |
| 1.4.1 主要研究内容 | 第18页 |
| 1.4.2 研究目标 | 第18-19页 |
| 2 实验材料和方法 | 第19-30页 |
| 2.1 试验材料 | 第19-22页 |
| 2.1.1 供试菌株 | 第19页 |
| 2.1.2 抗生素及培养基 | 第19-20页 |
| 2.1.3 实验所用质粒 | 第20页 |
| 2.1.4 酶,试剂和试剂盒 | 第20-21页 |
| 2.1.5 PCR反应引物,合成的片段及大小 | 第21-22页 |
| 2.1.6 缓冲液及试剂配制 | 第22页 |
| 2.2 实验方法 | 第22-30页 |
| 2.2.1 PCR扩增反应 | 第22-23页 |
| 2.2.2 分子生物学基本操作 | 第23页 |
| 2.2.3 耻垢分枝杆菌基因组DNA的粗提取 | 第23页 |
| 2.2.4 耻垢分枝杆菌质粒的提取 | 第23-24页 |
| 2.2.5 同源交换臂的设计及克隆 | 第24页 |
| 2.2.6 敲除载体的构建 | 第24-25页 |
| 2.2.7 基因敲除过程 | 第25-26页 |
| 2.2.8 Southern blot | 第26页 |
| 2.2.9 电镜观察 | 第26页 |
| 2.2.10 胁迫条件下生长曲线的测定 | 第26-27页 |
| 2.2.11 互补实验 | 第27页 |
| 2.2.12 Real-Time PCR表达检测 | 第27-28页 |
| 2.2.13 胁迫条件下互补型菌株的生长曲线测定 | 第28页 |
| 2.2.14 H_2O_2诱变频率的测定 | 第28-30页 |
| 3 结果与分析 | 第30-46页 |
| 3.1 MsmwhiB3基因的敲除 | 第30-34页 |
| 3.1.1 敲除载体的构建 | 第32页 |
| 3.1.2 双交换菌株的获得 | 第32-34页 |
| 3.2 Southern blot | 第34-35页 |
| 3.2.1 野生型及突变型的总DNA提取结果 | 第34页 |
| 3.2.2 探针的制备及Southern blot | 第34-35页 |
| 3.3 形态学研究 | 第35-37页 |
| 3.3.1 单菌落形态及沉降研究 | 第35-36页 |
| 3.3.2 菌体的扫描电镜观察 | 第36-37页 |
| 3.4 各种胁迫条件下Wt Msm和MsmΔwhiB3的生长曲线测定 | 第37-39页 |
| 3.4.1 H_2O_2的各种浓度梯度下的生长曲线测定 | 第37-38页 |
| 3.4.2 各种pH条件下的生长曲线测定 | 第38-39页 |
| 3.5 各种互补菌株的构建 | 第39-43页 |
| 3.5.1 MsmwhiB3full与MtbwhiB3full的氨基酸序列比对分析及突变体互补型的设计 | 第39-40页 |
| 3.5.2 MsmwhiB3full,MsmwhiB3ΔC,MtbwhiB3full,MtbwhiB3ΔC的表达载体构建及验证 | 第40-42页 |
| 3.5.3 MsmwhiB3full,MsmwhiB3ΔC,MtbwhiB3full,MtbwhiB3ΔC的表达检测 | 第42-43页 |
| 3.6 各种胁迫条件下的互补型的生长曲线测定 | 第43-44页 |
| 3.7 各种互补型在H_2O_2(7.84 mM)条件下的胁迫频率差异 | 第44-46页 |
| 4 总结与讨论 | 第46-49页 |
| 4.1 总结 | 第46页 |
| 4.2 讨论 | 第46-48页 |
| 4.2.1 MsmwhiB3和MtbwhiB3在维持细胞形态和大小的比较 | 第46-47页 |
| 4.2.2 抗氧化压力和酸性胁迫压力讨论 | 第47页 |
| 4.2.3 互补效应讨论 | 第47-48页 |
| 4.3 展望 | 第48-49页 |
| 致谢 | 第49-50页 |
| 参考文献 | 第50-56页 |
