| 摘要 | 第1-5页 |
| Abstract | 第5-9页 |
| 1 前言 | 第9-25页 |
| ·血栓及溶栓药物概述 | 第9-11页 |
| ·纤溶系统和血栓形成 | 第9-10页 |
| ·溶栓药物的研究进展 | 第10-11页 |
| ·组织纤维蛋白酶原激活剂(tPA) | 第11-13页 |
| ·tPA的分子结构 | 第11-12页 |
| ·tPA的作用机制 | 第12-13页 |
| ·组织型纤溶酶原激活剂tPA突变体 | 第13-15页 |
| ·Reteplase (rPA) | 第13-15页 |
| ·Tenecteplase (TNK-tPA) | 第15页 |
| ·Monteplase | 第15页 |
| ·Lanoteplase(nPA) | 第15页 |
| ·K1K2Pu嵌合体 | 第15页 |
| ·tPA及其突变体表达系统的开发 | 第15-19页 |
| ·大肠杆菌表达系统 | 第16页 |
| ·酵母菌表达系统 | 第16-17页 |
| ·丝状真菌表达系统 | 第17页 |
| ·昆虫细胞表达系统 | 第17-18页 |
| ·植物细胞表达系统 | 第18页 |
| ·哺乳动物细胞表达系统 | 第18-19页 |
| ·选择大肠杆菌作为高效表达体系表达rPA | 第19-20页 |
| ·镍柱对带有His-Tag标签蛋白的纯化 | 第20-22页 |
| ·IMAC简介 | 第20页 |
| ·影响IMAC纯化结果的因素 | 第20-22页 |
| ·立题依据 | 第22-23页 |
| ·设计框架 | 第23-25页 |
| 2 材料与方法 | 第25-37页 |
| ·材料 | 第25-29页 |
| ·细胞与菌株 | 第25页 |
| ·质粒 | 第25页 |
| ·引物 | 第25-26页 |
| ·试剂 | 第26页 |
| ·工具酶及试剂盒 | 第26-27页 |
| ·主要设备 | 第27-28页 |
| ·抗生素 | 第28页 |
| ·培养基 | 第28页 |
| ·主要溶液 | 第28-29页 |
| ·方法 | 第29-37页 |
| ·质粒的小量制备 | 第29-30页 |
| ·PCR反应 | 第30页 |
| ·琼脂糖凝胶电泳 | 第30-31页 |
| ·切胶回收 | 第31页 |
| ·双酶切反应 | 第31-32页 |
| ·连接反应 | 第32页 |
| ·大肠杆菌感受态细胞的制备 | 第32-33页 |
| ·转化E.coli DH5α | 第33页 |
| ·基因测序 | 第33页 |
| ·重组子转化E.coli BL21 | 第33页 |
| ·IPTG最佳诱导条件的确定,,并与乳糖最佳诱导条件进行比较 | 第33-34页 |
| ·BCA法蛋白定量 | 第34页 |
| ·镍柱法纯化融合蛋白 | 第34-35页 |
| ·Xa因子切割融合蛋白 | 第35页 |
| ·蛋白质凝胶电泳分析 | 第35-36页 |
| ·纤维蛋白平板法验证产物活性 | 第36-37页 |
| 3 结果与讨论 | 第37-53页 |
| ·tPA质粒的提取 | 第37页 |
| ·PCR扩增rPA片段 | 第37-39页 |
| ·pET40b-rPA质粒的构建 | 第39-41页 |
| ·IPTG最佳诱导表达条件的确定 | 第41-44页 |
| ·IPTG诱导表达浓度的优化 | 第41-42页 |
| ·IPTG诱导蛋白表达最佳时间的确定 | 第42-43页 |
| ·IPTG诱导蛋白表达最佳温度的确定 | 第43-44页 |
| ·乳糖最佳诱导表达条件的确定 | 第44-46页 |
| ·乳糖诱导蛋白表达最佳浓度的确定 | 第44-45页 |
| ·乳糖诱导蛋白表达持续时问的确定 | 第45-46页 |
| ·乳糖诱导蛋白表达温度的确定 | 第46页 |
| ·IPTG和乳糖最佳诱导表达条件的比较 | 第46-47页 |
| ·镍柱法纯化融合蛋白 | 第47-50页 |
| ·Xa因子切割融合蛋白 | 第50-51页 |
| ·纤维蛋白平板法验证产物活性 | 第51-53页 |
| 4 结论 | 第53-54页 |
| 5 展望 | 第54-55页 |
| 6 参考文献 | 第55-61页 |
| 7 论文发表情况 | 第61-62页 |
| 8 致谢 | 第62页 |