| 摘要 | 第6-8页 |
| ABSTRACT | 第8-9页 |
| 缩略语表(ABBREVIATION) | 第10-12页 |
| 第1章 文献综述 | 第12-17页 |
| 1.1 细小病毒科概述 | 第12-13页 |
| 1.1.1 博卡病毒简介 | 第12-13页 |
| 1.2 猪博卡病毒 | 第13-15页 |
| 1.2.1 PBoV的分子学特征 | 第13-14页 |
| 1.2.2 PBoV的流行病学及致病性 | 第14-15页 |
| 1.3 杆状病毒简介 | 第15-17页 |
| 1.3.1 Bac-to-Bac杆状病毒载体表达系统 | 第15-16页 |
| 1.3.2 杆状病毒表达重组蛋白在疫苗研究中的应用 | 第16-17页 |
| 第2章 研究目的与意义 | 第17-18页 |
| 第3章 材料与方法 | 第18-35页 |
| 3.1 试验材料 | 第18-23页 |
| 3.1.1 基因、细胞与菌株 | 第18页 |
| 3.1.2 载体与质粒 | 第18-20页 |
| 3.1.3 工具酶及主要试剂 | 第20页 |
| 3.1.4 培养基与抗生素及其配制 | 第20-21页 |
| 3.1.5 主要缓冲液与相关试剂及其配制 | 第21-23页 |
| 3.1.6 实验动物 | 第23页 |
| 3.2 试验方法 | 第23-35页 |
| 3.2.1 限制性内切酶酶切反应 | 第23-24页 |
| 3.2.2 PCR产物或酶切产物的电泳检测 | 第24页 |
| 3.2.3 PCR产物或酶切产物回收与纯化 | 第24页 |
| 3.2.4 DNA片段与载体的连接 | 第24-25页 |
| 3.2.5 大肠杆菌感受态细胞的制备(氯化钙法) | 第25页 |
| 3.2.6 连接产物的转化 | 第25-26页 |
| 3.2.7 质粒的提取与鉴定 | 第26-27页 |
| 3.2.8 构建重组杆状病毒的操作流程及示意图 | 第27-28页 |
| 3.2.9 重组穿梭载体(Bacmid)的构建 | 第28页 |
| 3.2.10 重组穿梭载体(Bacmid)的提取 | 第28-29页 |
| 3.2.11 重组杆状病毒获得 | 第29页 |
| 3.2.12 重组杆状病毒扩增 | 第29页 |
| 3.2.13 Western blotting检测目的蛋白在真核细胞中的表达 | 第29-31页 |
| 3.2.14 间接免疫荧光试验(IFA)检测目的蛋白的体外表达 | 第31页 |
| 3.2.15 病毒样颗粒(VLPs)的电镜观察 | 第31页 |
| 3.2.16 细胞免疫的检测 | 第31-33页 |
| 3.2.17 动物试验 | 第33-34页 |
| 3.2.18 统计学方法 | 第34-35页 |
| 第4章 结果与分析 | 第35-45页 |
| 4.1 表达PBoV VP2基因重组杆状病毒的构建 | 第35-38页 |
| 4.1.1 PCR扩增PBoV VP2基因 | 第35页 |
| 4.1.2 转移载体pFastHTB-VP2的构建 | 第35-36页 |
| 4.1.3 重组穿梭载体Bacmid-VP2的构建 | 第36-37页 |
| 4.1.4 重组杆状病毒rBV-VP2的获得 | 第37-38页 |
| 4.2 重组杆状病毒表达PBoV VP2融合蛋白的鉴定 | 第38-40页 |
| 4.2.1 Western-blot检测rBV-VP2表达的融合蛋白 | 第38页 |
| 4.2.2 间接免疫荧光试验(IFA)检测目的蛋白的体外表达 | 第38-39页 |
| 4.2.3 PBoV病毒样颗粒(VLPs)的电镜观察 | 第39-40页 |
| 4.3 重组PBoV VP2蛋白的原核表达与纯化 | 第40-41页 |
| 4.3.1 原核表达质粒pET-30a(+)-VP2的构建 | 第40页 |
| 4.3.2 重组VP2蛋白的原核表达和纯化 | 第40-41页 |
| 4.4 杆状病毒表达的PBoV VP2蛋白免疫原性的研究 | 第41-45页 |
| 4.4.1 PBoV VP2蛋白免疫小鼠产生的ELISA抗体水平比较 | 第41-42页 |
| 4.4.2 PBoV VP2蛋白免疫小鼠激活脾细胞分泌的IFN-γ水平分析 | 第42-43页 |
| 4.4.3 PBoV VP2蛋白免疫小鼠诱导产生的T细胞增殖反应 | 第43-44页 |
| 4.4.4 实时荧光定量PCR检测免疫小鼠脾细胞中IFN-γ mRNA表达 | 第44-45页 |
| 第5章 讨论与结论 | 第45-49页 |
| 5.1 讨论 | 第45-48页 |
| 5.1.1 猪博卡病毒基因组结构分析 | 第45-46页 |
| 5.1.2 猪博卡病毒VP2重组蛋白的表达 | 第46页 |
| 5.1.3 PBoV VP2蛋白组装成病毒样颗粒观察 | 第46页 |
| 5.1.4 PBoV VP2蛋白的免疫原性研究 | 第46-48页 |
| 5.1.5 病毒样颗粒的应用前景 | 第48页 |
| 5.2 结论 | 第48-49页 |
| 参考文献 | 第49-54页 |
| 致谢 | 第54-55页 |
| 附录 | 第55页 |
