| 致谢 | 第5-6页 |
| 摘要 | 第6-7页 |
| Abstract | 第7-8页 |
| 第一章 文献综述 | 第12-25页 |
| 1.1 异丁醇简介 | 第12-14页 |
| 1.1.1 异丁醇的用途 | 第12-13页 |
| 1.1.2 异丁醇的供需现状 | 第13-14页 |
| 1.2 异丁醇的生物合成 | 第14-18页 |
| 1.2.1 Ehrlich代谢途径 | 第15-16页 |
| 1.2.2 异丁醇代谢途径 | 第16-18页 |
| 1.3 生物法合成异丁醇的研究进展 | 第18-22页 |
| 1.3.1 产异丁醇大肠杆菌的构建 | 第18-19页 |
| 1.3.2 产异丁醇枯草芽孢杆菌的构建 | 第19-20页 |
| 1.3.3 产异丁醇酵母菌的构建 | 第20-21页 |
| 1.3.4 产异丁醇谷氨酸棒状杆菌的构建 | 第21页 |
| 1.3.5 产异丁醇微球藻细胞的构建 | 第21-22页 |
| 1.4 多酶的共表达 | 第22-23页 |
| 1.5 代谢途径中的限速酶 | 第23页 |
| 1.6 本文研究思路 | 第23-25页 |
| 第二章 产异丁醇大肠杆菌的构建 | 第25-46页 |
| 2.1 引言 | 第25页 |
| 2.2 材料与方法 | 第25-37页 |
| 2.2.1 菌种与质粒 | 第25-27页 |
| 2.2.2 实验仪器 | 第27-29页 |
| 2.2.3 药品与试剂 | 第29-31页 |
| 2.2.4 实验方法 | 第31-37页 |
| 2.3 结果与讨论 | 第37-45页 |
| 2.3.1 PCR获取五种酶基因 | 第37-38页 |
| 2.3.2 重叠PCR连接ilvC与ilvD基因 | 第38-39页 |
| 2.3.3 重组质粒的构建及验证 | 第39-41页 |
| 2.3.4 工程菌Eco(CDF+RSF)和Eco(CDF+ACYC)的构建 | 第41页 |
| 2.3.5 工程菌发酵产异丁醇 | 第41-43页 |
| 2.3.6 工程菌的蛋白共表达 | 第43-45页 |
| 2.4 本章小结 | 第45-46页 |
| 第三章 Eco(CDF+ACYC)产异丁醇代谢途径中限速酶的研究 | 第46-61页 |
| 3.1 引言 | 第46页 |
| 3.2 材料与方法 | 第46-53页 |
| 3.2.1 质粒与菌种 | 第46-47页 |
| 3.2.2 药品与试剂 | 第47-48页 |
| 3.2.3 实验方法 | 第48-53页 |
| 3.3 结果与讨论 | 第53-60页 |
| 3.3.1 重组质粒pETDuet-kivd的构建及验证 | 第53-54页 |
| 3.3.2 三质粒共转化工程菌的构建及验证 | 第54-56页 |
| 3.3.3 三质粒共转化工程菌产异丁醇能力的比较 | 第56-58页 |
| 3.3.4 三质粒共转化菌诱导后各酶活的检测及比较 | 第58-59页 |
| 3.3.5 三质粒共转化工程菌的蛋白共表达 | 第59-60页 |
| 3.4 本章小结 | 第60-61页 |
| 第四章 基于限速酶的共表达策略优化 | 第61-69页 |
| 4.1 引言 | 第61页 |
| 4.2 材料与方法 | 第61-63页 |
| 4.2.1 质粒与菌种 | 第61-62页 |
| 4.2.2 药品与试剂 | 第62页 |
| 4.2.3 实验方法 | 第62-63页 |
| 4.3 结果与讨论 | 第63-68页 |
| 4.3.1 重组质粒pCDFDuet-alsS的构建 | 第63页 |
| 4.3.2 重组质粒pET30-kivd及pRSFDuet-kivd的构建 | 第63-64页 |
| 4.3.3 优化菌Eco01及Eco02的构建 | 第64页 |
| 4.3.4 优化菌Eco01及Eco02发酵产异丁醇 | 第64-66页 |
| 4.3.5 优化菌Eco01及Eco02中KDCA的活力及蛋白表达量分析 | 第66-68页 |
| 4.4 本章小结 | 第68-69页 |
| 第五章 结论与展望 | 第69-71页 |
| 5.1 结论 | 第69页 |
| 5.2 展望 | 第69-71页 |
| 参考文献 | 第71-77页 |
| 附录 | 第77-84页 |
| 附录1 异丁醇气相色谱图 | 第77页 |
| 附录2 发酵液中异丁醇的GC-MS图 | 第77-78页 |
| 附录3 异丁醛气相色谱图 | 第78页 |
| 附录4 核苷酸序列 | 第78-84页 |
| 作者简介 | 第84页 |
