| 摘要 | 第1-9页 |
| Abstract | 第9-11页 |
| 缩写词表 | 第11-12页 |
| 第一章 文献综述 | 第12-27页 |
| ·植物次生代谢产物 | 第12页 |
| ·托品烷生物碱 | 第12-15页 |
| ·莨菪碱 | 第13页 |
| ·山莨菪碱 | 第13页 |
| ·东莨菪碱 | 第13-14页 |
| ·樟柳碱 | 第14-15页 |
| ·托品烷生物碱合成途径 | 第15-18页 |
| ·腐胺-N-甲基转移酶（PMT） | 第16-17页 |
| ·托品酮还原酶 I(TRI)和托品酮还原酶II(TRII) | 第17-18页 |
| ·莨菪碱6β-羟化酶（H6H） | 第18页 |
| ·三分三植物性状概述 | 第18-19页 |
| ·提高药用植物次生代谢产物的生产途径 | 第19-22页 |
| ·愈伤组织及细胞培养 | 第20-21页 |
| ·农杆菌介导遗传转化 | 第21-22页 |
| ·转基因 | 第22页 |
| ·影响毛状根生长及其次生代谢产物合成因素 | 第22-26页 |
| ·氮源和碳源 | 第23-24页 |
| ·植物激素 | 第24页 |
| ·温度和光照 | 第24-25页 |
| ·PH 值 | 第25-26页 |
| ·课题研究目的及意义 | 第26-27页 |
| 第二章 材料与方法 | 第27-38页 |
| ·实验材料 | 第27-29页 |
| ·植物材料 | 第27页 |
| ·载体及菌种 | 第27页 |
| ·主要仪器设备 | 第27-28页 |
| ·试剂及药品 | 第28页 |
| ·常用试剂 | 第28-29页 |
| ·三分三毛状根培养条件的优化 | 第29-32页 |
| ·培养基的配制 | 第29-30页 |
| ·毛状根接种培养 | 第30-31页 |
| ·毛状根生长状况统计 | 第31页 |
| ·毛状根中托品烷生物碱含量检测 | 第31-32页 |
| ·不同诱导子对三分三毛状根的诱导 | 第32页 |
| ·不同诱导子的制备 | 第32页 |
| ·诱导处理 | 第32页 |
| ·生长指标测定 | 第32页 |
| ·托品烷生物碱含量的测定 | 第32页 |
| ·带有 AaPMT1 和AaH6H 的植物双价表达载体的构建 | 第32-34页 |
| ·植物双元表达载体pCAMBIA1304+的构成 | 第32-33页 |
| ·植物双价表达载体pCAMBIA1304~++AaPMT1+AaH6H 的构建 | 第33-34页 |
| ·C58C1 介导AaPMT1、AaH6H、AaPMT1+AaH6H 遗传转化三分三 | 第34-36页 |
| ·发根农杆菌C58C1 感受态细胞的制备 | 第34页 |
| ·发根农杆菌工程菌株的获得 | 第34-35页 |
| ·发根农杆菌 C58C1 介导pCAMBIA1304~~++AaPMT1 、pCAMBIA1304~~++AaH6H、pCAMBIA1304~~++AaPMT1+AaH6H 遗传转化三分三 | 第35-36页 |
| ·三分三转AaPMT1、AaH6H、AaPMT1+AaH6H 基因毛状根的获得 | 第36-38页 |
| ·三分三转基因毛状根PCR 鉴定 | 第36页 |
| ·三分三转基因毛状根液体培养 | 第36页 |
| ·转基因毛状根AaPMT1、AaH6H 表达分析 | 第36-37页 |
| ·转基因毛状根托品烷生物碱测定 | 第37-38页 |
| 第三章 结果与讨论 | 第38-59页 |
| ·莨菪碱、山莨菪碱、东莨菪碱和樟柳碱的HPLC 标准曲线 | 第38-39页 |
| ·莨菪碱、山莨菪碱、东莨菪碱和樟柳碱标准品和样品 HPLC 图谱 | 第39-40页 |
| ·三分三毛状根培养条件的优化 | 第40-45页 |
| ·不同种类培养基对三分三毛状根生长及托品烷生物碱合成的影响 | 第40-41页 |
| ·不同碳源对三分三毛状根生长及托品烷生物碱合成的影响 | 第41-42页 |
| ·不同氮源对三分三毛状根生长及托品烷生物碱合成的影响 | 第42-44页 |
| ·不同PH 值对三分三毛状根生长及托品烷生物碱合成的影响 | 第44-45页 |
| ·不同诱导子对三分三毛状根生长和托品烷生物碱含量积累的影响 | 第45-48页 |
| ·诱导子对三分三毛状根生长势的影响 | 第45-46页 |
| ·三分三毛状根诱导后托品烷生物碱含量积累 | 第46-48页 |
| ·植物双价表达载体pCAMBIA1304~++AaPMT1+AaH6H 的构建 | 第48-49页 |
| ·三分三的遗传转化 | 第49-52页 |
| ·AaPMT1 单基因的转化 | 第49-50页 |
| ·AaH6H 单基因的转化 | 第50-51页 |
| ·AaPMT1+AaH6H 双基因的转化 | 第51-52页 |
| ·转基因毛状根基因表达分析 | 第52-59页 |
| ·AaPMT1 转基因毛状根中 AaPMT1 表达分析以及含量测定 | 第52-54页 |
| ·AaH6H 转基因毛状根中 AaH6H 表达分析以及生物碱含量测定 | 第54-56页 |
| ·双基因转化毛状根AaPMT1、AaH6H 表达分析以及生物碱含量测定 | 第56-59页 |
| 第四章 总结与展望 | 第59-62页 |
| ·研究结论 | 第59-60页 |
| ·后续研究方向 | 第60-62页 |
| 参考文献 | 第62-67页 |
| 硕士期间发表的论文及成果 | 第67-68页 |
| 致谢 | 第68页 |
