| 摘要 | 第6-8页 |
| Abstract | 第8-9页 |
| 第一章 前言 | 第13-34页 |
| 一 基因治疗与基因编辑 | 第13-16页 |
| 二 CRISPR-Cas9系统 | 第16-25页 |
| 2.1 CRISPR-Cas9系统的来源 | 第16-17页 |
| 2.2 CRISPR-Cas9系统的组成与应用 | 第17-21页 |
| 2.3 CRISPR-Cas9系统与遗传疾病的基因治疗 | 第21-23页 |
| 2.4 CRISPR-Cas9系统的输送方式 | 第23-24页 |
| 2.5 CRISPR-Cas9系统的特异性 | 第24-25页 |
| 三 B型血友病 | 第25-30页 |
| 3.1 B型血友病的简介 | 第25-27页 |
| 3.2 B型血友病的治疗 | 第27-30页 |
| 四 本课题研究背景 | 第30-34页 |
| 第二章 利用CRISPR-Cas9系统构建F9~(Y381D)突变小鼠 | 第34-58页 |
| 一 引言 | 第34-35页 |
| 二 材料与方法 | 第35-50页 |
| 2.1 主要实验试剂与仪器 | 第35-41页 |
| 2.2 实验方法 | 第41-50页 |
| 三 结果与讨论 | 第50-56页 |
| 3.1 F9~(Y381D)点突变小鼠的构建 | 第50-54页 |
| 3.2 F9~(Y381D)点突变小鼠中F9基因表达水平的测定 | 第54-55页 |
| 3.3 F9~(Y381D)点突变小鼠的凝血时间的测定 | 第55页 |
| 3.4 F9~(Y381D)点突变小鼠的尾部凝血实验 | 第55-56页 |
| 四 结语 | 第56-58页 |
| 第三章 利用CRISPR-Cas9质粒系统在成体肝脏细胞内修复F9基因Y381D位点的突变 | 第58-76页 |
| 一 引言 | 第58-59页 |
| 二 材料与方法 | 第59-66页 |
| 2.1 主要实验试剂与仪器 | 第59-62页 |
| 2.2 实验方法 | 第62-66页 |
| 三 结果与讨论 | 第66-74页 |
| 3.1 CRISPR-Cas9质粒与同源修复DNA模板的设计 | 第66-67页 |
| 3.2 注射质粒的肝脏感染率研究 | 第67-69页 |
| 3.3 注射CRISPR质粒与同源重组模板改善小鼠凝血功能障碍 | 第69-71页 |
| 3.4 注射CRISPR质粒与同源重组模板修复F9基因Y381D突变 | 第71-73页 |
| 3.5 注射质粒未引起肝脏损伤 | 第73-74页 |
| 四 结语 | 第74-76页 |
| 第四章 利用CRISPR-Cas9腺病毒系统在成体肝脏细胞内修复F9基因Y381D位点的突变 | 第76-90页 |
| 一 引言 | 第76-77页 |
| 二 材料与方法 | 第77-81页 |
| 2.1 主要实验试剂与仪器 | 第77-79页 |
| 2.2 实验方法 | 第79-81页 |
| 三 结果与讨论 | 第81-89页 |
| 3.1 Cas9腺病毒与同源重组模板腺病毒的设计 | 第81页 |
| 3.2 注射腺病毒4天的小鼠肝脏细胞的感染率与基因编辑效率 | 第81-83页 |
| 3.3 注射AdvCas9与AdvG/T腺病毒未能缩短小鼠活化酶原凝血时间 | 第83-86页 |
| 3.4 AdvCas9与AdvG/T腺病毒在肝脏内未出现脱靶现象 | 第86-87页 |
| 3.5 注射腺病毒引起严重的肝损伤 | 第87-89页 |
| 四 结语 | 第89-90页 |
| 第五章 总结与展望 | 第90-94页 |
| 附录 | 第94-97页 |
| 参考文献 | 第97-108页 |
| 科研成果 | 第108-109页 |
| 致谢 | 第109-111页 |
