| 摘要 | 第7-8页 |
| Abstract | 第8-9页 |
| 缩写名词表 | 第10-11页 |
| 1 前言 | 第11-26页 |
| 1.1 表观遗传学概述 | 第11页 |
| 1.2 真核细胞的染色质结构 | 第11-12页 |
| 1.3 染色质重塑酶 | 第12-15页 |
| 1.3.1 染色质重塑因子的分类 | 第13-14页 |
| 1.3.2 CHD家族 | 第14-15页 |
| 1.4 组蛋白修饰 | 第15-19页 |
| 1.4.1 组蛋白甲基化 | 第16-17页 |
| 1.4.2 组蛋白H3K27甲基化 | 第17-19页 |
| 1.5 组蛋白修饰的识别 | 第19-21页 |
| 1.6 PHD结构域的研究进展 | 第21-23页 |
| 1.7 结构生物学概述 | 第23-25页 |
| 1.7.1 X射线晶体学 | 第24-25页 |
| 1.8 研究的目的与意义 | 第25-26页 |
| 2 材料和方法 | 第26-33页 |
| 2.1 实验材料和试剂 | 第26页 |
| 2.2 实验方法 | 第26-33页 |
| 2.2.1 生物信息学分析方法 | 第26-27页 |
| 2.2.2 表达载体的构建 | 第27页 |
| 2.2.3 小量测试表达 | 第27-28页 |
| 2.2.4 蛋白的大量表达和纯化 | 第28页 |
| 2.2.5 Tricine-SDS-PAGE | 第28-29页 |
| 2.2.6 紫外分光光度法测蛋白浓度 | 第29页 |
| 2.2.7 短肽的合成 | 第29页 |
| 2.2.8 初始结晶条件筛选 | 第29-30页 |
| 2.2.9 晶体的优化 | 第30页 |
| 2.2.10 复合物晶体的生长 | 第30-31页 |
| 2.2.11 微量热泳动MST测定蛋白与多肽互作 | 第31页 |
| 2.2.12 等温滴定量热法ITC测定蛋白与多肽互作 | 第31-32页 |
| 2.2.13 衍射数据的收集 | 第32-33页 |
| 3 实验结果 | 第33-52页 |
| 3.1 CHR729的生物信息分析 | 第33-34页 |
| 3.2 PHD(78-123)小量测试表达 | 第34-35页 |
| 3.3 pET28b-sumo-PHD (78-123)大量表达及纯化 | 第35-38页 |
| 3.3.1 亲和层析 | 第35页 |
| 3.3.2 凝胶过滤层析 | 第35-38页 |
| 3.4 pGEX-GST-6p-1-PHD (78-123)大量表达及纯化 | 第38-40页 |
| 3.4.1 亲和层析 | 第38页 |
| 3.4.2 凝胶过滤层析 | 第38-40页 |
| 3.5 PHD(78-123)晶体生长及优化 | 第40-42页 |
| 3.5.1 结晶条件初筛结果 | 第40-41页 |
| 3.5.2 晶体优化 | 第41-42页 |
| 3.6 PHD(78-123)蛋白衍射数据收集及数据处理 | 第42-44页 |
| 3.7 PHD(78-123)晶体结构解析、修正 | 第44页 |
| 3.8 最终模型的质量评估 | 第44-46页 |
| 3.9 CHR729-PHD(78-123)的结构分析 | 第46-48页 |
| 3.9.1 CHR729-PHD(78-123)的整体结构 | 第46-47页 |
| 3.9.2 CHR729-PHD(78-123)与已解析的PHD结构的比较 | 第47-48页 |
| 3.10 复合物晶体的衍射和解析 | 第48-49页 |
| 3.11 MST检测PHD结构域与H3K27me3的互作 | 第49-51页 |
| 3.12 ITC检测PHD结构域与H3K27me3的互作 | 第51页 |
| 3.13 PHD (67-138)及与H3K27me3短肽复合物的晶体生长 | 第51-52页 |
| 4 讨论 | 第52-56页 |
| 4.1 不同截短片段对结晶的影响 | 第52页 |
| 4.2 PHD是一个多功能结构域 | 第52-53页 |
| 4.3 CHR729-PHD与H3K27me3可能的作用方式 | 第53-56页 |
| 参考文献 | 第56-64页 |
| 附录 | 第64-67页 |
| 致谢 | 第67页 |
