| 中文摘要 | 第3-4页 |
| Abstract | 第4-5页 |
| 英文缩写词及注解 | 第9-10页 |
| 第一章 引言 | 第10-24页 |
| 1.1 氨基糖苷类抗生素 | 第10-14页 |
| 1.1.1 氨基糖苷类抗生素简介 | 第10页 |
| 1.1.2 氨基糖苷类抗生素的分类 | 第10-13页 |
| 1.1.3 氨基糖苷类抗生素的生物合成研究进展 | 第13-14页 |
| 1.2 小单孢菌研究进展 | 第14-15页 |
| 1.2.1 小单孢菌简介 | 第14-15页 |
| 1.2.2 小单孢菌生物合成基因研究进展 | 第15页 |
| 1.3 黑暗链霉菌与其次级代谢产物 | 第15-20页 |
| 1.3.1 黑暗链霉菌简介 | 第15-16页 |
| 1.3.2 黑暗链霉菌次级代谢产物 | 第16-17页 |
| 1.3.3 黑暗链霉菌次级代谢产物生物合成研究进展 | 第17-20页 |
| 1.4 小单孢菌—黑暗链霉菌生物合成特色基因组合研究方法 | 第20-22页 |
| 1.4.1 基因敲除和基因替换 | 第20-21页 |
| 1.4.2 接合转移 | 第21-22页 |
| 1.4.3 异源表达 | 第22页 |
| 1.5 选题依据与研究内容 | 第22-24页 |
| 1.5.1 选题依据 | 第22-23页 |
| 1.5.2 研究内容 | 第23-24页 |
| 第二章 材料与方法 | 第24-36页 |
| 2.1 实验材料 | 第24-28页 |
| 2.1.1 菌株与质粒 | 第24-25页 |
| 2.1.2 培养基 | 第25-26页 |
| 2.1.3 试剂 | 第26-27页 |
| 2.1.4 仪器与设备 | 第27-28页 |
| 2.2 实验方法 | 第28-36页 |
| 2.2.1 聚合酶链式反应(PCR) | 第28-29页 |
| 2.2.2 DNA酶切反应 | 第29页 |
| 2.2.3 DNA酶连反应 | 第29-30页 |
| 2.2.4 DNA片段去磷酸化 | 第30页 |
| 2.2.5 DNA片段回收 | 第30-31页 |
| 2.2.6 大肠杆菌感受态细胞的制备及转化 | 第31页 |
| 2.2.7 碱裂解法提取质粒DNA(小量制备) | 第31-32页 |
| 2.2.8 菌种培养与保藏 | 第32页 |
| 2.2.9 黑暗链霉菌基因组DNA提取 | 第32-33页 |
| 2.2.10 大肠杆菌-链霉菌接合转移 | 第33页 |
| 2.2.11 黑暗链霉菌的摇瓶发酵 | 第33-34页 |
| 2.2.12 抗生素效价测定(二剂量法) | 第34页 |
| 2.2.13 黑暗链霉菌次级代谢产物的提取 | 第34-35页 |
| 2.2.14 次级代谢产物的检测 | 第35-36页 |
| 第三章 氨甲酰妥布霉素工程菌的构建 | 第36-44页 |
| 3.1 重组质粒pKB5的构建 | 第36-39页 |
| 3.1.1 同源交换臂的扩增 | 第37-38页 |
| 3.1.2 重组质粒pBK5的构建与验证 | 第38-39页 |
| 3.2 接合转移与单交换突变株的筛选 | 第39-40页 |
| 3.3 双交换阻断突变株的筛选 | 第40-41页 |
| 3.4 aprK阻断突变株发酵与产物分析 | 第41-43页 |
| 3.5 小结 | 第43-44页 |
| 第四章 安普霉素工程菌的构建 | 第44-52页 |
| 4.1 重组质粒pMB4的构建 | 第44-47页 |
| 4.1.1 同源交换臂的扩增 | 第45-47页 |
| 4.1.2 重组质粒pMB4的构建与验证 | 第47页 |
| 4.2 接合转移与单交换突变株的筛选 | 第47页 |
| 4.3 双交换阻断突变株的筛选 | 第47-49页 |
| 4.4 tobM2阻断突变株发酵与产物分析 | 第49-50页 |
| 4.5 小结 | 第50-52页 |
| 第五章 sisI基因替换aprD4工程菌的构建 | 第52-60页 |
| 5.1 重组质粒pID6的构建 | 第52-56页 |
| 5.1.1 同源交换臂与sisI基因的扩增 | 第53-54页 |
| 5.1.2 重组质粒pID6的构建 | 第54-56页 |
| 5.2 基因组合突变株的筛选 | 第56-57页 |
| 5.2.1 单交换工程菌的鉴定 | 第56页 |
| 5.2.2 基因组合突变株的筛选 | 第56-57页 |
| 5.3 工程菌TW414的发酵及次级代谢产物分析 | 第57-58页 |
| 5.4 小结 | 第58-60页 |
| 第六章 genP基因替换aprD4工程菌的构建 | 第60-66页 |
| 6.1 重组质粒pHP3的构建 | 第60-63页 |
| 6.1.1 genP基因PCR扩增 | 第61-62页 |
| 6.1.2 重组质粒pHP3的构建 | 第62-63页 |
| 6.2 基因组合突变株的筛选 | 第63-64页 |
| 6.2.1 单交换工程菌的鉴定 | 第63页 |
| 6.2.2 基因组合突变株的筛选 | 第63-64页 |
| 6.3 工程菌TW416次级代谢产物分析 | 第64-65页 |
| 6.4 小结 | 第65-66页 |
| 第七章 forK基因替换tobM2工程菌的构建 | 第66-74页 |
| 7.1 重组质粒pKM5的构建 | 第66-70页 |
| 7.1.1 交换臂及forK基因PCR扩增 | 第68-69页 |
| 7.1.2 重组质粒pKM5的构建与验证 | 第69-70页 |
| 7.2 基因组合工程菌的构建 | 第70-72页 |
| 7.2.1 单交换工程菌的鉴定 | 第70-71页 |
| 7.2.2 基因组合工程菌的筛选 | 第71-72页 |
| 7.3 工程菌TW420代谢产物分析 | 第72页 |
| 7.4 小结 | 第72-74页 |
| 第八章 产西索霉素工程菌GbKB4发酵特性研究 | 第74-80页 |
| 8.1 材料与方法 | 第74-75页 |
| 8.1.1 材料 | 第74页 |
| 8.1.2 方法 | 第74-75页 |
| 8.2 结果与讨论 | 第75-79页 |
| 8.2.1 出发菌发酵单位检测 | 第75页 |
| 8.2.2 紫外诱变筛选高产菌 | 第75页 |
| 8.2.3 生长特性考察 | 第75-76页 |
| 8.2.4 绛红色小单孢菌GbkB4发酵考察 | 第76-78页 |
| 8.2.5 发酵代谢调控曲线 | 第78-79页 |
| 8.3 小结 | 第79-80页 |
| 全文总结 | 第80-82页 |
| 参考文献 | 第82-86页 |
| 致谢 | 第86-87页 |
| 附录 | 第87-89页 |
| 个人简历 | 第89页 |