| 缩略词表 | 第8-9页 |
| 中文摘要 | 第9-12页 |
| Abstract | 第12-15页 |
| 前言 | 第16-19页 |
| 第一章 BoNT/AH表位预测和突变体构建 | 第19-31页 |
| 1 材料 | 第19-20页 |
| 1.1 质粒 | 第19页 |
| 1.2 工具酶及主要生化试剂 | 第19页 |
| 1.3 主要仪器 | 第19-20页 |
| 1.4 主要溶液配置方法 | 第20页 |
| 2 方法 | 第20-21页 |
| 2.1 计算机软件预测抗原表位 | 第20页 |
| 2.2 突变方案 | 第20页 |
| 2.3 引物设计 | 第20页 |
| 2.4 突变体构建 | 第20-21页 |
| 3 结果 | 第21-30页 |
| 3.1 计算机软件预测抗原表位 | 第21页 |
| 3.2 突变方案 | 第21-22页 |
| 3.3 引物设计 | 第22-26页 |
| 3.4 突变体构建 | 第26-30页 |
| 4 讨论 | 第30页 |
| 5 小结 | 第30-31页 |
| 第二章 BoNT/AHc突变体的构建、表达和纯化 | 第31-41页 |
| 1 材料 | 第31-32页 |
| 1.1 质粒 | 第31页 |
| 1.2 工具酶及主要生化试剂 | 第31页 |
| 1.3 主要仪器 | 第31页 |
| 1.4 主要溶液配置方法 | 第31-32页 |
| 2 方法 | 第32-33页 |
| 2.1 p TIG-AHc突变体构建 | 第32-33页 |
| 2.2 p TIG-AHc突变体蛋白表达水平及形式鉴定 | 第33页 |
| 2.3 p TIG-AHc突变体蛋白纯化 | 第33页 |
| 3 结果 | 第33-40页 |
| 3.1 p TIG-AHc突变体质粒构建 | 第33-36页 |
| 3.2 p TIG-AHc突变体蛋白表达水平及形式鉴定 | 第36-37页 |
| 3.3 p TIG-AHc突变体蛋白纯化 | 第37-40页 |
| 4 讨论 | 第40页 |
| 5 小结 | 第40-41页 |
| 第三章 BoNT/A抗体的制备及鉴定 | 第41-58页 |
| 第一节 BoNT/A鼠源性单克隆抗体的制备和鉴定 | 第41-46页 |
| 1 材料 | 第41-42页 |
| 1.1 质粒 | 第41页 |
| 1.2 工具酶及主要生化试剂 | 第41页 |
| 1.3 主要仪器 | 第41页 |
| 1.4 主要溶液配置方法 | 第41-42页 |
| 2 方法 | 第42-43页 |
| 2.1 Bo NT/AHc蛋白纯化 | 第42页 |
| 2.2 小鼠免疫 | 第42页 |
| 2.3 杂交瘤细胞株的建立 | 第42页 |
| 2.4 腹水的制备 | 第42页 |
| 2.5 单抗效价的测定 | 第42-43页 |
| 2.6 单抗特异性鉴定 | 第43页 |
| 2.7 分型 | 第43页 |
| 2.8 单抗识别位点分析 | 第43页 |
| 3 结果 | 第43-45页 |
| 3.1 Bo NT/AHc蛋白纯化 | 第43-44页 |
| 3.2 单抗的制备 | 第44页 |
| 3.3 单抗效价的测定结果 | 第44页 |
| 3.4 单克隆抗体特异性鉴定 | 第44页 |
| 3.5 分型 | 第44-45页 |
| 3.6 单抗识别位点分析 | 第45页 |
| 4 讨论 | 第45页 |
| 5 小结 | 第45-46页 |
| 第二节 BoNT/A中和抗体 3D12的表达 | 第46-53页 |
| 1 材料 | 第46-47页 |
| 1.1 菌株、质粒及细胞 | 第46页 |
| 1.2 工具酶及主要生化试剂 | 第46页 |
| 1.3 主要仪器 | 第46页 |
| 1.4 主要溶液配置方法 | 第46-47页 |
| 2 方法 | 第47-49页 |
| 2.1 3D12编码序列的设计 | 第47页 |
| 2.2 3D12表达载体的构建 | 第47页 |
| 2.3 3D12全抗体的瞬时表达 | 第47-48页 |
| 2.4 3D12抗体的纯化 | 第48页 |
| 2.5 Bo NT/AHc蛋白纯化 | 第48页 |
| 2.6 3D12效价的测定 | 第48页 |
| 2.7 3D12的特异性鉴定 | 第48页 |
| 2.8 BoNTA受体FGFR3、SV2C与 3D12间的竞争作用 | 第48-49页 |
| 2.9 3D12抗体亲和力常数测定 | 第49页 |
| 3 结果 | 第49-52页 |
| 3.1 3D12编码序列的设计 | 第49页 |
| 3.2 3D12表达载体的构建 | 第49-50页 |
| 3.3 3D12抗体的纯化 | 第50页 |
| 3.4 Bo NT/AHc蛋白纯化 | 第50页 |
| 3.5 单抗效价的测定结果 | 第50页 |
| 3.6 单克隆抗体特异性鉴定 | 第50-51页 |
| 3.7 Bo NTA受体与 3D12间的竞争作用 | 第51页 |
| 3.8 3D12抗体亲和力常数测定 | 第51-52页 |
| 4 讨论 | 第52页 |
| 5 小结 | 第52-53页 |
| 第三节 BoNT/A抗体ML01/ML02的表达 | 第53-58页 |
| 1 材料 | 第53-54页 |
| 1.1 菌株、质粒及细胞 | 第53页 |
| 1.2 工具酶及主要生化试剂 | 第53页 |
| 1.3 主要仪器 | 第53页 |
| 1.4 主要溶液配置方法 | 第53-54页 |
| 2 方法 | 第54-55页 |
| 2.1 ML01/ML02表达载体的构建 | 第54页 |
| 2.2 ML01/ML02抗体的瞬时表达 | 第54页 |
| 2.3 ML01/ML02抗体的纯化 | 第54页 |
| 2.4 ML01/ML02效价的测定 | 第54-55页 |
| 2.5 ML01/ML02的特异性鉴定 | 第55页 |
| 2.6 ML01/ML02抗体亲和力常数测定 | 第55页 |
| 2.7 ML01/ML02小鼠中和活性实验 | 第55页 |
| 3 结果 | 第55-57页 |
| 3.1 ML01/ML02抗体的纯化 | 第55-56页 |
| 3.2 ML01/ML02抗体的效价测定 | 第56页 |
| 3.3 ML01/ML02的特异性鉴定 | 第56页 |
| 3.4 ML01/ML02抗体亲和力常数测定 | 第56-57页 |
| 3.5 ML01/ML02小鼠中和活性实验 | 第57页 |
| 4 讨论 | 第57页 |
| 5 小结 | 第57-58页 |
| 第四章 BoNT/AHc中和表位分析 | 第58-67页 |
| 1 材料 | 第58-59页 |
| 1.1 质粒、菌株 | 第58页 |
| 1.2 主要试剂 | 第58-59页 |
| 1.3 主要仪器 | 第59页 |
| 1.4 主要溶液配置方法 | 第59页 |
| 2 方法 | 第59-61页 |
| 2.1 22 个p TIG-AHc T突变体蛋白与受体FGFR3/SV2C的相互作用 | 第59-60页 |
| 2.2 22 个p TIG-AHc T突变体蛋白与单抗 3D12的活性检测 | 第60页 |
| 2.3 30 个p TIG-AHT诱导菌液与单抗ML01/ML02的活性检测 | 第60页 |
| 2.4 22 个p TIG-AHc T蛋白与单抗ML01/ML02的ELISA检测 | 第60-61页 |
| 3 结果 | 第61-65页 |
| 3.1 22 个p TIG-AHc T突变体蛋白与受体FGFR3/SV2C的相互作用 | 第61-62页 |
| 3.2 22 个p TIG-AHc T突变体蛋白与单抗 3D12的活性检测 | 第62页 |
| 3.3 30 个p TIG-AHT与单抗ML01、ML02的活性检测 | 第62-63页 |
| 3.4 22 个p TIG-AHc T蛋白与单抗ML01、ML02的ELISA检测 | 第63-65页 |
| 4 讨论 | 第65-66页 |
| 5 小结 | 第66-67页 |
| 总结 | 第67-68页 |
| 参考文献 | 第68-71页 |
| 个人简历 | 第71-72页 |
| 致谢 | 第72页 |
