| 摘要 | 第1-7页 |
| Abstract | 第7-13页 |
| 第一章 引言 | 第13-30页 |
| ·PED 的流行 | 第13-16页 |
| ·国外流行情况 | 第13-15页 |
| ·国内流行情况 | 第15-16页 |
| ·PEDV 的分类地位 | 第16-17页 |
| ·PEDV 的分子特征 | 第17-23页 |
| ·5’非编码区和 3’非编码区（5’UTR, 3’UTR） | 第18-19页 |
| ·复制酶基因及其产物 | 第19-23页 |
| ·结构基因及其产物 | 第23页 |
| ·PED 的诊断 | 第23-25页 |
| ·PED 的治疗 | 第25页 |
| ·PED 的疫苗研究 | 第25-27页 |
| ·冠状病毒反向遗传学的研究 | 第27-28页 |
| ·本研究的目的和意义 | 第28-30页 |
| 第二章 PEDV 全基因组序列分析及 2011 年流行毒株 S 基因分析 | 第30-63页 |
| ·材料与方法 | 第30-36页 |
| ·细胞和毒株 | 第30页 |
| ·样品 | 第30页 |
| ·主要试剂 | 第30页 |
| ·主要仪器设备 | 第30-31页 |
| ·引物 | 第31页 |
| ·病毒 RNA 提取 | 第31-32页 |
| ·cDNA 合成 | 第32-33页 |
| ·PCR | 第33页 |
| ·PCR 产物鉴定及纯化回收 | 第33-34页 |
| ·PCR 产物连接与转化 | 第34-35页 |
| ·重组质粒提取、鉴定及序列测定 | 第35页 |
| ·全基因组及 S 基因序列确定、分析和比较 | 第35-36页 |
| ·参考序列 | 第36页 |
| ·结果 | 第36-59页 |
| ·CV777-P125、CH/S、CH/FJND-3/2011 基因组结构 | 第36-37页 |
| ·CV777-P125、CH/S、CH/FJND-3/20115’UTR、3’UTR 的分子特征 | 第37-38页 |
| ·CV777-P125、CH/S、CH/FJND-3/2011 复制酶基因 | 第38-39页 |
| ·CV777-P125、CH/S、CH/FJND-3/2011 转录调节序列（TRSs）的特征 | 第39页 |
| ·PEDV S 基因的分子特征 | 第39-40页 |
| ·PEDV 流行毒株系统发育关系 | 第40-47页 |
| ·PEDV S 基因同源性分析 | 第47-48页 |
| ·PEDV S 蛋白分子特征 | 第48页 |
| ·PEDV S 蛋白糖基化位点分析 | 第48页 |
| ·PEDV S 蛋白抗原区域、抗原表位分析 | 第48-58页 |
| ·PEDV S 蛋白同源性分析 | 第58-59页 |
| ·讨论 | 第59-63页 |
| ·CV777-P125、CH/S、CH/FJND-3/2011 全基因组序列 | 第59-60页 |
| ·2011 年流行毒株分析 | 第60-63页 |
| 第三章 PEDV 感染性克隆的构建 | 第63-92页 |
| ·材料和方法 | 第63-73页 |
| ·病毒、细胞、载体、感受态细胞 | 第63页 |
| ·主要试剂 | 第63页 |
| ·主要仪器设备 | 第63-64页 |
| ·限制性内切酶的选择 | 第64页 |
| ·pBAC-PEDV-5’-3’中间质粒构成元件及引物 | 第64页 |
| ·pBAC-PEDV-5’-3’中间质粒的构建 | 第64-67页 |
| ·pBAC-PEDV-5’-3’中间质粒的鉴定 | 第67页 |
| ·pBAC-PEDV-5’-3’中间质粒（逆 LacZ 方向）重新构建 | 第67-68页 |
| ·目的片段扩增引物 | 第68页 |
| ·目的片段扩增、回收 | 第68-69页 |
| ·目的片段酶切、回收 | 第69页 |
| ·中间质粒 pBAC-PEDV-5’-3’线性化处理 | 第69-70页 |
| ·重组质粒鉴定引物 | 第70页 |
| ·目的片段连接、重组质粒鉴定 | 第70-71页 |
| ·全长 cDNA 连接、鉴定 | 第71-72页 |
| ·重组病毒的拯救 | 第72页 |
| ·重组病毒的鉴定 | 第72-73页 |
| ·结果 | 第73-89页 |
| ·CMV-PEDV 5’片段的扩增 | 第73页 |
| ·PEDV3’-HDV-BGH 片段的扩增 | 第73-74页 |
| ·CMV-PEDV5’-3’-HDV-BGH 片段的扩增、酶切 | 第74页 |
| ·pBAC-PEDV-5’-3’中间质粒的鉴定 | 第74-75页 |
| ·pBAC-PEDV-5’-3’中间质粒（逆 LacZ 方向）重新构建 | 第75-77页 |
| ·目的片段的扩增、酶切 | 第77-78页 |
| ·目的片段、中间质粒 pBAC-PEDV-5’-3’酶切产物回收、纯化 | 第78-79页 |
| ·pAB、pC、pDE 、pDEAB 重组质粒的鉴定 | 第79-83页 |
| ·pBAC-PEDV-Full 质粒鉴定 | 第83-85页 |
| ·pBAC-PEDV-Full 质粒序列分析 | 第85-86页 |
| ·重组病毒的鉴定 | 第86-89页 |
| ·讨论 | 第89-92页 |
| 第四章 全文结论 | 第92-93页 |
| 参考文献 | 第93-109页 |
| 致谢 | 第109-110页 |
| 作者简历 | 第110页 |
