| 摘要 | 第4-7页 |
| ABSTRACT | 第7-10页 |
| 第一章 前言 | 第14-29页 |
| 1.1 课题背景与意义 | 第14-15页 |
| 1.2 蛋白质的乙酰化修饰及其功能 | 第15-21页 |
| 1.2.1 蛋白质的乙酰化修饰 | 第15-16页 |
| 1.2.2 组蛋白乙酰化酶与去乙酰化酶 | 第16-18页 |
| 1.2.3 非组蛋白的乙酰化修饰 | 第18-21页 |
| 1.2.3.1 非组蛋白乙酰化与蛋白结构的关系 | 第18-19页 |
| 1.2.3.2 非组蛋白的乙酰化通过与泛素化修饰竞争提高蛋白稳定性 | 第19-21页 |
| 1.3 家蚕蚕丝蛋白 | 第21-25页 |
| 1.3.1 丝素蛋白组成及结构 | 第21-22页 |
| 1.3.2 丝胶蛋白结构及特性 | 第22-25页 |
| 1.3.2.1 家蚕丝胶蛋白 | 第22页 |
| 1.3.2.2 非家蚕蚕丝丝胶蛋白 | 第22-23页 |
| 1.3.2.3 家蚕丝胶基因的结构与表达特性 | 第23-24页 |
| 1.3.2.4 丝胶蛋白的物理特性 | 第24-25页 |
| 1.4 家蚕营养储藏蛋白及其功能 | 第25-26页 |
| 1.5 论文研究目的和主要研究内容 | 第26-29页 |
| 1.5.1 研究目的 | 第26页 |
| 1.5.2 主要研究内容 | 第26-28页 |
| 1.5.3 课题创新点 | 第28-29页 |
| 第二章 家蚕蛋白乙酰化修饰的高通量鉴定 | 第29-52页 |
| 2.1 材料、试剂及仪器设备 | 第29-32页 |
| 2.1.1 主要材料与仪器 | 第29页 |
| 2.1.2 主要试剂 | 第29页 |
| 2.1.3 主要试剂配制 | 第29-32页 |
| 2.2 方法 | 第32-34页 |
| 2.2.1 家蚕总蛋白的提取和乙酰化的Western blot检测 | 第32页 |
| 2.2.2 乙酰化肽段富集和高精度质谱nano-HPLC-MS/MS分析 | 第32-33页 |
| 2.2.3 乙酰化蛋白的注释和生物信息学功能分析 | 第33-34页 |
| 2.2.3.1 蛋白注释 | 第33-34页 |
| 2.2.3.2 功能富集分析 | 第34页 |
| 2.2.3.3 二级结构分析 | 第34页 |
| 2.2.3.4 乙酰化位点序列模式分析 | 第34页 |
| 2.3 结果与讨论 | 第34-50页 |
| 2.3.1 家蚕总蛋白乙酰化Western blot检测 | 第34-36页 |
| 2.3.2 高精度质谱高通量鉴定家蚕蛋白乙酰化修饰 | 第36-37页 |
| 2.3.3 家蚕蛋白乙酰化位点具有特定的模式和偏好性 | 第37-39页 |
| 2.3.4 家蚕乙酰化蛋白的功能特征 | 第39-43页 |
| 2.3.5 乙酰化修饰可能为家蚕营养储藏、转运和代谢调控的常见机制 | 第43-48页 |
| 2.3.6 乙酰化修饰可能参与家蚕幼虫期蚕丝的合成调控 | 第48-50页 |
| 2.4 本章结论 | 第50-52页 |
| 第三章 家蚕各发育期营养储藏蛋白和丝蛋白乙酰化的鉴定及其功能分析 | 第52-65页 |
| 3.1 材料、试剂及仪器设备 | 第52-55页 |
| 3.1.1 主要材料与仪器 | 第52页 |
| 3.1.2 主要试剂 | 第52页 |
| 3.1.3 主要试剂配制 | 第52-55页 |
| 3.2 方法 | 第55-57页 |
| 3.2.1 家蚕的饲养 | 第55页 |
| 3.2.2 家蚕各发育期营养储藏蛋白乙酰化的鉴定 | 第55页 |
| 3.2.3 家蚕各发育期丝蛋白乙酰化的鉴定 | 第55页 |
| 3.2.4 SDS-PAGE鉴定 | 第55-56页 |
| 3.2.5 Western blot鉴定 | 第56页 |
| 3.2.6 PAGE胶点蛋白HPLC-MS/MS鉴定 | 第56-57页 |
| 3.3 结果与讨论 | 第57-63页 |
| 3.3.1 家蚕各发育期营养储藏蛋白乙酰化的情况 | 第57-59页 |
| 3.3.2 家蚕各发育期蚕丝蛋白乙酰化的情况 | 第59-60页 |
| 3.3.3 丝胶蛋白乙酰化的功能预测与分析 | 第60-63页 |
| 3.4 本章结论 | 第63-65页 |
| 第四章 乙酰化修饰提高SP2蛋白水平的机制研究及其调控蚕丝蛋白合成的过程分析 | 第65-75页 |
| 4.1 材料、试剂及仪器设备 | 第65-66页 |
| 4.1.1 主要材料与仪器 | 第65页 |
| 4.1.2 主要试剂 | 第65页 |
| 4.1.3 主要试剂配制 | 第65-66页 |
| 4.2 方法 | 第66-68页 |
| 4.2.1 家蚕BmN细胞贴壁培养 | 第66页 |
| 4.2.2 TSA及C646对SP2蛋白含量的影响 | 第66-67页 |
| 4.2.3 CHX抑制蛋白质合成对TSA上调SP2含量的影响 | 第67页 |
| 4.2.4 MG132抑制蛋白质的泛素化降解途径对TSA上调SP2含量的影响 | 第67页 |
| 4.2.5 家蚕细胞中重组HIS-SP2蛋白的免疫共沉淀 | 第67-68页 |
| 4.2.6 SP2蛋白赖氨酸乙酰化及泛素化修饰的竞争鉴定 | 第68页 |
| 4.3 结果与讨论 | 第68-73页 |
| 4.3.1 乙酰化修饰对SP2蛋白表达含量的影响 | 第68-70页 |
| 4.3.2 乙酰化修饰通过抑制蛋白酶体降解途径来提高SP2蛋白含量 | 第70-71页 |
| 4.3.3 乙酰化修饰通过竞争SP2蛋白的泛素化修饰来抑制泛素介导的蛋白酶体降解途径 | 第71-72页 |
| 4.3.4 乙酰化修饰调控蚕丝蛋白合成的过程分析 | 第72-73页 |
| 4.4 本章结论 | 第73-75页 |
| 第五章 乙酰化修饰对家蚕细胞和蚕丝合成的影响研究 | 第75-88页 |
| 5.1 材料、试剂及仪器设备 | 第75-77页 |
| 5.1.1 主要材料与仪器 | 第75页 |
| 5.1.2 主要试剂 | 第75-76页 |
| 5.1.3 主要试剂配制 | 第76-77页 |
| 5.2 方法 | 第77-80页 |
| 5.2.1 SP2蛋白真核表达载体pIEx1BmSP2的构建 | 第77-79页 |
| 5.2.1.1 SP2基因的PCR扩增 | 第77-78页 |
| 5.2.1.2 PCR产物的酶切 | 第78页 |
| 5.2.1.3 连接反应 | 第78-79页 |
| 5.2.1.4 连接产物的转化 | 第79页 |
| 5.2.1.5 重组质粒的筛选与鉴定 | 第79页 |
| 5.2.1.6 重组质粒的测序鉴定 | 第79页 |
| 5.2.2 乙酰化对家蚕细胞生长的影响 | 第79-80页 |
| 5.2.3 乙酰化蚕丝样品的制备 | 第80页 |
| 5.2.4 乙酰化蚕丝的性能测试 | 第80页 |
| 5.3 结果与讨论 | 第80-87页 |
| 5.3.1 SP2真核表达载体的构建 | 第80-81页 |
| 5.3.2 乙酰化对家蚕BmN细胞抗凋亡的作用 | 第81-82页 |
| 5.3.3 乙酰化蚕丝的力学性能 | 第82-84页 |
| 5.3.4 乙酰化蚕丝的红外光谱检测 | 第84-85页 |
| 5.3.5 乙酰化蚕丝的X射线衍射检测 | 第85页 |
| 5.3.6 乙酰化蚕丝的扫描电镜表征 | 第85-87页 |
| 5.4 本章结论 | 第87-88页 |
| 第六章 结论与展望 | 第88-91页 |
| 6.1 结论 | 第88-89页 |
| 6.2 展望 | 第89-91页 |
| 参考文献 | 第91-99页 |
| 致谢 | 第99-100页 |
| 博士在读期间发表论文 | 第100-101页 |
| 附录 | 第101-128页 |
