| 缩略词 | 第6-8页 |
| 摘要 | 第8-11页 |
| Abstract | 第11-13页 |
| 前言 | 第14-26页 |
| 1 冠状病毒 | 第14-16页 |
| 1.1 冠状病毒的结构 | 第14-15页 |
| 1.2 冠状病毒的生命周期 | 第15-16页 |
| 1.3 冠状病毒引起的疾病 | 第16页 |
| 2 MERS和MERS-Co V N | 第16-18页 |
| 2.1 MERS和MERS-Co V | 第16-17页 |
| 2.2 MERS-Co V N蛋白 | 第17-18页 |
| 3 补体系统和MASP2 | 第18-21页 |
| 3.1 补体激活途径与生物学效应 | 第18-20页 |
| 3.2 MASP2 | 第20-21页 |
| 4 EF-1A | 第21-24页 |
| 4.1 翻译延伸因子分类和功能 | 第21-22页 |
| 4.2 EF-1A的功能 | 第22-24页 |
| 5 本研究的立题依据和拟解决的科学问题 | 第24-25页 |
| 6 理论意义和实用价值 | 第25页 |
| 7 主要的研究思路和方法 | 第25-26页 |
| 材料与方法 | 第26-39页 |
| 1. 材料 | 第26-27页 |
| 1.1 细胞、质粒、菌株、病毒 | 第26页 |
| 1.2 主要实验仪器和试剂 | 第26-27页 |
| 2. 实验方法 | 第27-39页 |
| 2.1 构建重组载体及合成引物 | 第27-30页 |
| 2.2 细胞的复苏、培养、传代和冻存 | 第30页 |
| 2.3 转染和感染 | 第30-31页 |
| 2.4 免疫沉淀、SDS-PAGE电泳、考染和免疫印迹 | 第31-32页 |
| 2.5 Alpha LISA技术测相互作用 | 第32-33页 |
| 2.6 Flag标签蛋白的制备 | 第33页 |
| 2.7 MASP2水解底物C4生化反应 | 第33-34页 |
| 2.8 MERS-Co V N蛋白的原核表达和纯化 | 第34页 |
| 2.9 BCA法测MERS-Co V N蛋白浓度 | 第34-35页 |
| 2.10 补体成分C4沉淀实验 | 第35页 |
| 2.11 尾静脉注射和组织样品准备 | 第35-36页 |
| 2.12 免疫荧光 | 第36页 |
| 2.13 细胞同步化和细胞流式 | 第36-37页 |
| 2.14 CCK-8 法测生长曲线 | 第37页 |
| 2.15 蛋白体外翻译 | 第37-38页 |
| 2.16 Actin体外聚合、成束和电镜 | 第38-39页 |
| 结果 | 第39-75页 |
| 1 MERS-Co V N蛋白与MASP2相互作用 | 第39-44页 |
| 1.1 MERS-Co V N带Flag标签和GFP标签的蛋白表达 | 第39-40页 |
| 1.2 MERS-Co V N蛋白与细胞内表达的MASP2相互作用 | 第40-42页 |
| 1.3 MERS-Co V N蛋白与MASP2相互作用的关键氨基酸残基 | 第42-44页 |
| 2 MERS-Co V N蛋白促进MASP2水解底物C4 | 第44-45页 |
| 3 MERS-Co V N蛋白促进血清中补体C4活化 | 第45-49页 |
| 3.1 MERS-Co V N蛋白的原核表达和纯化 | 第46-48页 |
| 3.2 MERS-Co V N蛋白促进补体C4沉积 | 第48-49页 |
| 4 MERS-Co V N蛋白加剧LPS致炎小鼠的炎症 | 第49-52页 |
| 4.1 MERS-Co V N蛋白加剧了LPS致炎小鼠的肺损伤 | 第49-50页 |
| 4.2 MERS-Co V N蛋白降低了LPS诱导炎症小鼠的生存率 | 第50-52页 |
| 5 MERS-Co V N蛋白引起细胞多核 | 第52-54页 |
| 6 MERS-Co V N蛋白与EF-1A相互作用 | 第54-58页 |
| 6.1 细胞表达的EF-1A与MERS-Co V N蛋白的相互作用 | 第54-55页 |
| 6.2 MERS-Co V N蛋白与EF-1A相互作用的结构域和关键氨基酸 | 第55-58页 |
| 7 MERS-Co V N蛋白引起细胞多核的结构域和关键氨基酸序列 | 第58-62页 |
| 8 MERS-Co V N蛋白干扰EF-1A与actin的相互作用 | 第62-65页 |
| 9 MERS-Co V N蛋白扰乱actin的Bundling | 第65-68页 |
| 10 MERS-Co V N蛋白抑制细胞生长 | 第68-71页 |
| 10.1 MERS-Co V N蛋白阻碍细胞周期 | 第68页 |
| 10.2 MERS-Co V N蛋白抑制细胞增殖 | 第68-71页 |
| 11 MERS-Co V N蛋白促进蛋白翻译与EF-1A无关 | 第71-75页 |
| 讨论 | 第75-84页 |
| 1 MERS-Co V N蛋白与MASP2相互作用和MASP2功能的关系 | 第75-76页 |
| 2 MERS-Co V N对MASP2酶活性影响的生化反应和补体沉积实验 | 第76-77页 |
| 3 诱导急性炎症的动物模型及MERS-Co V N蛋白对该动物模型的致病性关系 | 第77-79页 |
| 4 MERS-Co V N和EF-1A相互作用结构域与细胞多核的关系 | 第79-81页 |
| 5 MERS-Co V N蛋白引起细胞多核的可能机制 | 第81-82页 |
| 6 MERS-Co V N蛋白与细胞增殖和蛋白翻译的关系 | 第82-84页 |
| 结论 | 第84-85页 |
| 参考文献 | 第85-91页 |
| 个人简历 | 第91-92页 |
| 致谢 | 第92页 |
