| 中文摘要 | 第3-6页 |
| 英文摘要 | 第6-8页 |
| 缩略词 | 第11-12页 |
| 1 绪论 | 第12-20页 |
| 1.1 引言 | 第12页 |
| 1.2 研究背景 | 第12-16页 |
| 1.2.1 莱氏野村菌概况 | 第12-13页 |
| 1.2.2 昆虫病原真菌侵染机制研究 | 第13-14页 |
| 1.2.3 微菌核的研究进展 | 第14页 |
| 1.2.4 真菌对外界酸碱环境的相应机制和途径 | 第14-15页 |
| 1.2.5 Pal I和PacC基因的研究进展 | 第15-16页 |
| 1.3 研究目的和意义 | 第16-17页 |
| 1.4 研究内容 | 第17页 |
| 1.5 技术路线 | 第17页 |
| 1.6 本研究的创新之处 | 第17-20页 |
| 2 材料和方法 | 第20-42页 |
| 2.1 实验材料 | 第20-22页 |
| 2.1.1 菌株和昆虫 | 第20页 |
| 2.1.2 载体 | 第20页 |
| 2.1.3 培养基和溶液配制 | 第20-21页 |
| 2.1.4 主要化学试剂和试剂盒 | 第21页 |
| 2.1.5 主要仪器设备 | 第21-22页 |
| 2.1.6 常用生物学软件 | 第22页 |
| 2.2 实验方法 | 第22-42页 |
| 2.2.1 菌种活化和保存 | 第22页 |
| 2.2.2 微菌核的诱导培养 | 第22-23页 |
| 2.2.3 真菌基因组DNA的提取（试剂盒法） | 第23页 |
| 2.2.4 真菌总RNA的提取以及反转录（试剂盒法） | 第23-25页 |
| 2.2.5 实时荧光定量PCR | 第25-26页 |
| 2.2.6 质粒的提取（试剂盒法） | 第26-27页 |
| 2.2.7 基因克隆 | 第27-28页 |
| 2.2.8 FPNI-PCR技术扩增未知侧翼序列 | 第28-32页 |
| 2.2.9 生物信息学分析 | 第32页 |
| 2.2.10 基因敲除载体构建 | 第32-35页 |
| 2.2.11 大肠杆菌感受态的制备以及转化 | 第35-36页 |
| 2.2.12 重组质粒转入农杆菌感受态细胞（冻融法） | 第36页 |
| 2.2.13 农杆菌介导莱氏野村菌遗传转化 | 第36-37页 |
| 2.2.14 转化子的筛选验证 | 第37-38页 |
| 2.2.15 突变菌株表型分析 | 第38-39页 |
| 2.2.16 生物毒力测定 | 第39-40页 |
| 2.2.17 实验数据分析 | 第40-42页 |
| 3 结果与分析 | 第42-62页 |
| 3.1 基因克隆与分析 | 第42-47页 |
| 3.1.1 NrPalI和NrPacC基因克隆与结构分析 | 第42-43页 |
| 3.1.2 NrPalI和NrPacC基因生物信息学分析 | 第43-44页 |
| 3.1.3 同源序列比对及进化分析 | 第44-47页 |
| 3.2 敲除载体构架与突变菌株筛选 | 第47-51页 |
| 3.2.1 敲除载体构建 | 第47-50页 |
| 3.2.2 突变菌株筛选 | 第50-51页 |
| 3.3 基因敲除对菌株功能及性状的分析 | 第51-60页 |
| 3.3.1 突变体基本生长情况分析 | 第51-52页 |
| 3.3.2 胁迫条件下菌株表型分析 | 第52-57页 |
| 3.3.3 基因敲除对菌株微菌核的影响 | 第57-59页 |
| 3.3.4 基因表达模式分析 | 第59-60页 |
| 3.4 基因敲除对菌株毒力的影响 | 第60-62页 |
| 4 讨论 | 第62-64页 |
| 5 主要结论与后续工作建议 | 第64-66页 |
| 5.1 主要结论 | 第64页 |
| 5.2 后续工作建议 | 第64-66页 |
| 致谢 | 第66-68页 |
| 参考文献 | 第68-72页 |
| 附录 | 第72-75页 |
| A 作者在攻读硕士学位期间发表论文目录 | 第72页 |
| B 作者在攻读硕士学位期间参与科研项目 | 第72页 |
| C 蛋白序列名称及登录号 | 第72-73页 |
| D NrPalI和NrPacC全长cDNA序列 | 第73-75页 |
