| 摘要 | 第9-11页 |
| ABSTRACT | 第11-13页 |
| 缩略语表 | 第14-15页 |
| 第一章 文献综述 | 第15-25页 |
| 1 SS2毒力因子概述 | 第15-21页 |
| 1.1 荚膜多糖(CPS) | 第16页 |
| 1.2 溶菌酶释放蛋白(MRP)和胞外因子(EF) | 第16-17页 |
| 1.3 溶血素(SLY) | 第17-18页 |
| 1.4 纤粘连结合蛋白(FBPS) | 第18页 |
| 1.5 双组分信号转导系统(TCSTS) | 第18-19页 |
| 1.6 与酶类有关的新毒力因子 | 第19-20页 |
| 1.7 89K毒力岛的发现 | 第20页 |
| 1.8 其他的潜在毒力因子 | 第20-21页 |
| 2 SS2的致病机理 | 第21-22页 |
| 2.1 黏附机制 | 第21-22页 |
| 2.2 侵袭机制 | 第22页 |
| 3 实验室前期的工作基础 | 第22-23页 |
| 3.1 89K毒力岛的研究 | 第22-23页 |
| 3.2 蛋白组学对细胞表面蛋白的研究 | 第23页 |
| 4 本研究的目的和意义 | 第23-25页 |
| 第二章 ssu05_1815突变株和回复株的构建 | 第25-39页 |
| 1 材料和方法 | 第25-33页 |
| 1.1 材料 | 第25-28页 |
| 1.1.1 菌株和质粒 | 第25页 |
| 1.1.2 酶、试剂盒和主要试剂 | 第25-26页 |
| 1.1.3 猪链球菌感受态制备试剂配制 | 第26页 |
| 1.1.4 培养基 | 第26-27页 |
| 1.1.5 主要仪器 | 第27页 |
| 1.1.6 引物 | 第27-28页 |
| 1.2 方法 | 第28-33页 |
| 1.2.1 细菌培养 | 第28页 |
| 1.2.2 敲除载体的构建 | 第28-29页 |
| 1.2.3 回复载体的构建 | 第29-30页 |
| 1.2.4 猪链球菌感受态的制备 | 第30页 |
| 1.2.5 电转化 | 第30页 |
| 1.2.6 基因敲除突变株的筛选和鉴定 | 第30-31页 |
| 1.2.7 回复株的获得 | 第31页 |
| 1.2.8 回复株反转录的鉴定 | 第31-32页 |
| 1.2.8.1 RNA提取 | 第31-32页 |
| 1.2.8.2 去DNA污染 | 第32页 |
| 1.2.8.3 反转录 | 第32页 |
| 1.2.8.4 PCR鉴定 | 第32页 |
| 1.2.9 细菌基因组的提取方法 | 第32-33页 |
| 2 结果与分析 | 第33-36页 |
| 2.1 ssu05-1815敲除载体的构建 | 第33页 |
| 2.2 回复载体pAT18-C-1815的构建 | 第33-34页 |
| 2.3 敲除阳性克隆的获得 | 第34页 |
| 2.4 Δ1815突变株的鉴定 | 第34-35页 |
| 2.5 回复株的获得 | 第35页 |
| 2.6 回复株的反转录鉴定 | 第35-36页 |
| 2.7 突变株测序结果 | 第36页 |
| 3 讨论 | 第36-39页 |
| 3.1 敲除质粒的选择 | 第37页 |
| 3.2 回复质粒的选择 | 第37页 |
| 3.3 感受态的制备 | 第37-38页 |
| 3.4 突变株筛选方法的改进 | 第38页 |
| 3.5 回复株的反转录鉴定 | 第38-39页 |
| 第三章 突变株Δ1815与毒力的相关分析 | 第39-49页 |
| 1 材料与方法 | 第39-42页 |
| 1.1 材料 | 第39-40页 |
| 1.1.1 细胞株 | 第39页 |
| 1.1.2 试剂 | 第39页 |
| 1.1.3 主要动物 | 第39-40页 |
| 1.1.4 THY培养基配制 | 第40页 |
| 1.1.5 主要仪器 | 第40页 |
| 1.2 方法 | 第40-42页 |
| 1.2.1 突变株和野生株的生物活性分析 | 第40页 |
| 1.2.2 细胞培养 | 第40页 |
| 1.2.3 猪链球菌2型对细胞的黏附和侵袭情况 | 第40-41页 |
| 1.2.4 全血杀菌试验 | 第41页 |
| 1.2.5 CD1小鼠感染实验 | 第41页 |
| 1.2.6 试验猪竞争感染实验 | 第41-42页 |
| 2 结果与分析 | 第42-47页 |
| 2.1 生物活性分析 | 第42-43页 |
| 2.2 突变株与野生株与细胞的黏附比较 | 第43-44页 |
| 2.2.1 与Hep2细胞的黏附比较 | 第43页 |
| 2.2.2 与A549细胞的黏附比较 | 第43-44页 |
| 2.2.3 与HBMEC细胞的黏附比较 | 第44页 |
| 2.3 全血杀菌试验 | 第44-45页 |
| 2.4 CD1小鼠感染实验 | 第45-47页 |
| 2.5 试验猪竞争感染实验 | 第47页 |
| 3. 讨论 | 第47-49页 |
| 3.1 细胞黏附试验 | 第47-48页 |
| 3.2 动物实验 | 第48页 |
| 3.3 全血杀菌实验 | 第48-49页 |
| 第四章 ssu05-0969和ssu5-0973突变株的构建和毒力分析 | 第49-59页 |
| 1 材料和方法 | 第49-51页 |
| 1.1 材料 | 第49-50页 |
| 1.1.1 菌株、质粒和细胞株 | 第49-50页 |
| 1.1.2 主要试剂和主要仪器 | 第50页 |
| 1.1.3 引物 | 第50页 |
| 1.2 方法 | 第50-51页 |
| 1.2.1 缺失突变株的构建 | 第50-51页 |
| 1.2.2 突变株的毒力相关分析 | 第51页 |
| 2 结果与分析 | 第51-58页 |
| 2.1 敲除载体的构建 | 第51-52页 |
| 2.1.1 ssu05-0969敲除载体的构建 | 第51-52页 |
| 2.1.2 ssu05-0973敲除载体的构建 | 第52页 |
| 2.2 阳性克隆的获得 | 第52-53页 |
| 2.3 突变株的鉴定 | 第53-54页 |
| 2.3.1 Δ0969敲除突变株的鉴定 | 第53页 |
| 2.3.2 Δ0973敲除突变株的鉴定 | 第53-54页 |
| 2.3.3 测序结果 | 第54页 |
| 2.4 生物活性分析 | 第54-55页 |
| 2.5 突变株与野生株与细胞的黏附比较 | 第55-56页 |
| 2.6 全血杀菌实验 | 第56页 |
| 2.7 CD1小鼠竞争感染实验 | 第56-57页 |
| 2.8 试验猪竞争感染实验 | 第57-58页 |
| 3 讨论 | 第58-59页 |
| 第五章 结论与讨论 | 第59-64页 |
| 1 全文总结 | 第59-61页 |
| 1.1 基因ssu05_1815的实验结论 | 第59-60页 |
| 1.2 基因ssu05_0969和ssu05_0973的实验结论 | 第60-61页 |
| 2 讨论 | 第61-63页 |
| 2.1 ssu05_1815的毒力相关分析 | 第61-62页 |
| 2.2 ssu05_0969和ssu05_0973的毒力相关分析 | 第62-63页 |
| 3 展望 | 第63-64页 |
| 参考文献 | 第64-72页 |
| 致谢 | 第72-73页 |
| 附录1 各试剂盒操作步骤 | 第73-75页 |
| 附录Ⅱ 本研究主要试剂的配制 | 第75-76页 |
| 附录Ⅲ 在读硕士期间发表文章 | 第76页 |
