| 摘要 | 第5-7页 |
| abstract | 第7-8页 |
| 英文缩写对照表 | 第12-13页 |
| 第一章 绪论 | 第13-22页 |
| 1.1 薯蓣皂苷元及薯蓣皂苷简介 | 第13-14页 |
| 1.2 盾叶薯蓣简介 | 第14-15页 |
| 1.3 薯蓣皂苷元合成途径的研究进展 | 第15-21页 |
| 1.3.1 甲羟戊酸（MVA）途径与植物甾醇、萜类物质合成 | 第15-19页 |
| 1.3.2 2-甲基-D-赤藓糖醇4磷酸(MEP)途径相关酶的研究 | 第19-20页 |
| 1.3.3 植物中MEP途径与MVA途径之间的交流 | 第20-21页 |
| 1.4 本研究的目的和意义 | 第21-22页 |
| 第二章 盾叶薯蓣CMK及HDS基因的克隆与序列分析 | 第22-52页 |
| 2.1 试验材料 | 第22-24页 |
| 2.1.1 植物材料 | 第22页 |
| 2.1.2 菌株与载体 | 第22页 |
| 2.1.3 主要试剂 | 第22页 |
| 2.1.4 主要仪器 | 第22-23页 |
| 2.1.5 培养基 | 第23页 |
| 2.1.6 溶液 | 第23-24页 |
| 2.2 实验方法 | 第24-33页 |
| 2.2.1 盾叶薯蓣总RNA的提取 | 第24-25页 |
| 2.2.1.1 实验准备 | 第24页 |
| 2.2.1.2 RNA提取试剂盒 | 第24页 |
| 2.2.1.3 琼脂糖凝胶电泳检测RNA的质量 | 第24-25页 |
| 2.2.2 mRNA的反转录 | 第25页 |
| 2.2.3 盾叶薯蓣CMK和HDS基因cDNA核心片段的克隆和分析 | 第25-28页 |
| 2.2.3.1 简并引物的设计 | 第25页 |
| 2.2.3.2 盾叶薯蓣CMK基因核心片段的克隆 | 第25-26页 |
| 2.2.3.3 盾叶薯蓣HDS基因核心片段的克隆 | 第26-27页 |
| 2.2.3.4 PCR产物的回收 | 第27页 |
| 2.2.3.5 核心片段的回收、转化与测序 | 第27-28页 |
| 2.2.4 快速扩增盾叶薯蓣CMK和HDS基因cDNA的末端序列(RACE) | 第28-32页 |
| 2.2.4.1 盾叶薯蓣CMK和HDS基因特异引物的设计 | 第28-29页 |
| 2.2.4.2 盾叶薯蓣CMK和HDS末端的扩增 | 第29-32页 |
| 2.2.5 盾叶薯蓣CMK基因和HDS基因的生物信息学分析 | 第32-33页 |
| 2.3 结果与分析 | 第33-51页 |
| 2.3.1 盾叶薯蓣总RNA的提取与检测 | 第33页 |
| 2.3.2 CMK基因和HDS基因核心片段的克隆 | 第33-35页 |
| 2.3.3 CMK和HDS基因的末端克隆 | 第35-40页 |
| 2.3.4 DzCMK基因和DzHDS基因的生物信息学分析 | 第40-51页 |
| 2.3.4.1 DzCMK基因的核酸序列及氨基酸序列分析 | 第40页 |
| 2.3.4.2 盾叶薯蓣CMK基因重要功能区域分析 | 第40-43页 |
| 2.3.4.3 盾叶薯蓣CMK基因蛋白质进化树分析 | 第43-44页 |
| 2.3.4.4 盾叶薯蓣HDS基因核酸序列与氨基酸序列分析 | 第44-45页 |
| 2.3.4.5 盾叶薯蓣CMK基因重要功能区域分析 | 第45-50页 |
| 2.3.4.6 盾叶薯蓣HDS基因蛋白质进化树分析 | 第50-51页 |
| 2.4 本章小结 | 第51-52页 |
| 第三章 盾叶薯蓣CMK基因和HDS基因在大肠杆菌中的表达与功能验证 | 第52-59页 |
| 3.1 实验原理 | 第52页 |
| 3.2 材料与方法 | 第52-56页 |
| 3.2.1 材料 | 第52-53页 |
| 3.2.2 主要试剂及仪器 | 第53页 |
| 3.2.3 DzCMK基因和DzHDS基因编码序列的克隆 | 第53-54页 |
| 3.2.4 pTrc载体（空载）的构建 | 第54-55页 |
| 3.2.5 DzCMK和DzHDS基因原核表达载体的构建 | 第55页 |
| 3.2.6 DzCMK和DzHDS基因功能验证 | 第55-56页 |
| 3.3 结果与分析 | 第56-58页 |
| 3.3.1 DzCMK基因和DzHDS基因开放阅读框（ORF）序列克隆 | 第56-57页 |
| 3.3.2 pTrc-DzCMK和pTrc-HDS载体验证 | 第57页 |
| 3.3.3 菌落颜色比较 | 第57-58页 |
| 3.4 小结 | 第58-59页 |
| 第四章 DzCMK和DzHDS在烟草中的亚细胞定位 | 第59-73页 |
| 4.1 实验材料 | 第59-61页 |
| 4.1.1 植物材料 | 第59页 |
| 4.1.2 载体与菌株 | 第59-60页 |
| 4.1.3 主要试剂 | 第60页 |
| 4.1.4 培养基 | 第60-61页 |
| 4.2 实验方法 | 第61-67页 |
| 4.2.1 前导肽与GFP（绿色荧光蛋白）融合蛋白基因的扩增 | 第61-65页 |
| 4.2.2 植物表达载体的构建 | 第65页 |
| 4.2.3 植物表达载体转化农杆菌EHA105 | 第65-66页 |
| 4.2.4 农杆菌接到的烟草的遗传转化 | 第66-67页 |
| 4.2.5 转基因植物鉴定和亚细胞定位 | 第67页 |
| 4.3 结果分析 | 第67-72页 |
| 4.3.1 融合蛋白基因的扩增 | 第67-69页 |
| 4.3.2 植物表达载体的构建 | 第69-70页 |
| 4.3.3 转基因烟草植株的筛选与再生 | 第70页 |
| 4.3.4 转基因植株的GUS染色鉴定 | 第70页 |
| 4.3.5 转基因植株原始质体制备 | 第70-71页 |
| 4.3.6 转基因植物的定位观察分析 | 第71-72页 |
| 4.4 小结 | 第72-73页 |
| 第五章 讨论与展望 | 第73-76页 |
| 参考文献 | 第76-84页 |
| 致谢 | 第84-85页 |
| 附录 | 第85页 |
