| 摘要 | 第5-7页 |
| ABSTRACT | 第7-8页 |
| 缩略词表 | 第9-14页 |
| 第一章 绪论 | 第14-18页 |
| 1.1 CD38分子的结构与功能 | 第14页 |
| 1.1.1 CD38基因发现 | 第14页 |
| 1.1.2 CD38信号通路 | 第14页 |
| 1.2 CD38与多发性肿瘤关系 | 第14-15页 |
| 1.2.1 多发性骨髓瘤简介 | 第14-15页 |
| 1.2.2 多发性骨髓瘤治疗进展 | 第15页 |
| 1.2.3 CD38在组织细胞中的表达 | 第15页 |
| 1.3 CD38单克隆抗体国内外研究进展 | 第15-16页 |
| 1.3.1 国外研究进展 | 第15-16页 |
| 1.3.2 国内进展 | 第16页 |
| 1.4 论文研究目的、内容及技术路线 | 第16-18页 |
| 1.4.1 研究目的 | 第16页 |
| 1.4.2 研究内容 | 第16-17页 |
| 1.4.3 技术路线 | 第17-18页 |
| 第二章 CD38抗原及阳性对照品制备 | 第18-46页 |
| 2.1 前言 | 第18页 |
| 2.2 实验材料与仪器 | 第18-20页 |
| 2.2.1 质粒、引物、菌种及细胞 | 第18-19页 |
| 2.2.2 主要试剂 | 第19-20页 |
| 2.2.3 常用培养基 | 第20页 |
| 2.2.4 仪器设备 | 第20页 |
| 2.3 实验方法 | 第20-34页 |
| 2.3.1 CD38阳性抗体制备 | 第20-29页 |
| 2.3.2 CD38 ECD制备 | 第29-34页 |
| 2.3.3 CD38 FL稳定细胞系构建 | 第34页 |
| 2.4 实验结果 | 第34-42页 |
| 2.4.1 阳性抗体鉴定结果 | 第34-38页 |
| 2.4.2 CD38FL鉴定结果 | 第38-40页 |
| 2.4.3 CD38 ECD鉴定结果 | 第40-42页 |
| 2.5 实验讨论 | 第42-45页 |
| 2.5.1 信号肽选择 | 第42-43页 |
| 2.5.2 抗体表达系统选择 | 第43-44页 |
| 2.5.3 外源蛋白表达 | 第44-45页 |
| 2.6 实验小结 | 第45-46页 |
| 第三章 CD38单克隆抗体制备 | 第46-57页 |
| 3.1 前言 | 第46页 |
| 3.2 实验材料与仪器 | 第46-47页 |
| 3.2.1 细胞及动物 | 第46页 |
| 3.2.2 主要试剂 | 第46-47页 |
| 3.2.3 主要仪器设备 | 第47页 |
| 3.3 实验方法 | 第47-52页 |
| 3.3.1 CD38杂交瘤制备 | 第47-51页 |
| 3.3.2 杂交瘤上清ELISA筛选 | 第51页 |
| 3.3.3 克隆上清细胞结合实验 | 第51页 |
| 3.3.4 杂交瘤细胞亚克隆 | 第51-52页 |
| 3.3.5 腹水制备 | 第52页 |
| 3.3.6 腹水纯化 | 第52页 |
| 3.4 实验结果 | 第52-55页 |
| 3.4.1 小鼠尾静脉血清效价测定结果 | 第52-53页 |
| 3.4.2 细胞融合及阳性克隆ELISA筛选结果 | 第53-54页 |
| 3.4.3 ELISA阳性克隆上清与细胞结合实验结果 | 第54页 |
| 3.4.4 亚克隆后与CHO-CD38FL结合实验结果 | 第54-55页 |
| 3.4.5 腹水制备结果 | 第55页 |
| 3.5 实验讨论 | 第55-56页 |
| 3.5.1 小鼠免疫途径 | 第55-56页 |
| 3.5.2 抗原的选择 | 第56页 |
| 3.5.3 杂交瘤筛选 | 第56页 |
| 3.6 本章小结 | 第56-57页 |
| 第四章 抗体生物学功能研究 | 第57-68页 |
| 4.1 前言 | 第57页 |
| 4.2 实验材料及设备 | 第57-58页 |
| 4.2.1 细胞系 | 第57页 |
| 4.2.2 主要试剂 | 第57-58页 |
| 4.2.3 主要仪器设备 | 第58页 |
| 4.3 实验方法 | 第58-63页 |
| 4.3.1 杂交瘤抗体与Daudi细胞亲和力实验 | 第58-59页 |
| 4.3.2 CD38抗体亲和力测定 | 第59-60页 |
| 4.3.3 ADCC实验 | 第60-62页 |
| 4.3.4 CDC实验 | 第62-63页 |
| 4.4 实验结果 | 第63-66页 |
| 4.4.1 抗体与CD38+阳性Daudi细胞亲和力实验结果 | 第63-64页 |
| 4.4.2 杂交瘤抗体亲和力测定结果 | 第64页 |
| 4.4.3 抗体ADCC效应实验结果 | 第64-65页 |
| 4.4.4 抗体CDC效应实验结果 | 第65-66页 |
| 4.5 实验讨论 | 第66页 |
| 4.5.1 抗原表位 | 第66页 |
| 4.5.2 抗体亲和力测定 | 第66页 |
| 4.6 本章小结 | 第66-68页 |
| 第五章 CD38抗体人源化 | 第68-78页 |
| 5.1 前言 | 第68页 |
| 5.2 实验材料与仪器 | 第68-69页 |
| 5.2.1 质粒、引物及菌种 | 第68页 |
| 5.2.2 实验主要试剂 | 第68页 |
| 5.2.3 实验主要仪器设备 | 第68-69页 |
| 5.3 实验方法 | 第69-73页 |
| 5.3.1 抗体亚类及亚型鉴定 | 第69页 |
| 5.3.2 杂交瘤细胞总RNA提取 | 第69-70页 |
| 5.3.3 逆转录 | 第70页 |
| 5.3.4 cDNA扩增 | 第70-71页 |
| 5.3.5 目的基因鉴定及克隆 | 第71-72页 |
| 5.3.6 菌落测序及序列比对 | 第72页 |
| 5.3.7 鼠源抗体CDR移植 | 第72页 |
| 5.3.8 人源化抗体亲和力及生物学功能比较 | 第72-73页 |
| 5.4 实验结果 | 第73-77页 |
| 5.4.1 抗体类型鉴定结果 | 第73页 |
| 5.4.2 38C5总RNA电泳图 | 第73页 |
| 5.4.3 38C5轻链、重链可变区扩增结果 | 第73-74页 |
| 5.4.4 38C5轻、重链可变区序列分析及比对 | 第74-75页 |
| 5.4.5 人源化抗体亲和力测定 | 第75页 |
| 5.4.6 人源化抗体ADCC测定结果 | 第75-76页 |
| 5.4.7 人源化抗体CDC测定结果 | 第76-77页 |
| 5.5 实验讨论 | 第77页 |
| 5.6 本章小结 | 第77-78页 |
| 结论与展望 | 第78-80页 |
| 结论 | 第78页 |
| 创新点 | 第78页 |
| 展望 | 第78-80页 |
| 参考文献 | 第80-83页 |
| 附录 | 第83-90页 |
| 附录1 阳性抗体及CD38氨基酸序列表 | 第83-86页 |
| 附录2 CD38扩增引物表 | 第86页 |
| 附录3 鼠源抗体轻链扩增引物表 | 第86-87页 |
| 附录4 鼠源抗体重链扩增引物表 | 第87页 |
| 附录5 38C5人源化抗体序列表 | 第87-90页 |
| 攻读硕士学位期间取得的研究成果 | 第90-91页 |
| 致谢 | 第91-92页 |
| 附件 | 第92页 |
