| 摘要 | 第6-7页 |
| abstract | 第7-8页 |
| 英文缩略表 | 第13-14页 |
| 第一章 引言 | 第14-20页 |
| 1.1 猪带绦虫概述 | 第14-15页 |
| 1.1.1 猪带绦虫及猪囊虫病 | 第14-15页 |
| 1.1.2 猪囊虫病免疫学诊断 | 第15页 |
| 1.2 蛋白激酶A概述 | 第15-16页 |
| 1.3 蛋白激酶A在寄生虫中研究进展 | 第16-19页 |
| 1.3.1 刚地弓形虫PKA研究进展 | 第16-17页 |
| 1.3.2 疟原虫PKA研究进展 | 第17页 |
| 1.3.3 利什曼原虫PKA研究进展 | 第17-18页 |
| 1.3.4 血吸虫PKA研究进展 | 第18-19页 |
| 1.3.5 猪带绦虫PKA研究进展 | 第19页 |
| 1.4 研究目的与意义 | 第19-20页 |
| 第二章 猪带绦虫PKA基因的鉴定与序列分析 | 第20-33页 |
| 2.1 试验材料 | 第20页 |
| 2.1.1 虫体、菌种和试剂 | 第20页 |
| 2.1.2 主要仪器 | 第20页 |
| 2.2 试验方法 | 第20-23页 |
| 2.2.1 猪囊尾蚴总RNA的提取 | 第20-21页 |
| 2.2.2 cDNA合成 | 第21页 |
| 2.2.3 猪囊尾蚴Tspka-r和Tspka-c基因的扩增 | 第21-22页 |
| 2.2.4 猪囊尾蚴Tspka-r和Tspka-c基因的序列分析 | 第22-23页 |
| 2.3 试验结果 | 第23-31页 |
| 2.3.1 猪囊尾蚴Tspka-r和Tspka-c基因的克隆 | 第23页 |
| 2.3.2 猪囊尾蚴Tspka-r和Tspka-c基因的序列分析 | 第23-31页 |
| 2.4 讨论 | 第31-33页 |
| 第三章 基于TsPKA-r蛋白间接ELISA方法的建立 | 第33-47页 |
| 3.1 试验材料 | 第33页 |
| 3.1.1 虫株与血清 | 第33页 |
| 3.1.2 菌株与载体 | 第33页 |
| 3.1.3 主要试剂 | 第33页 |
| 3.1.4 主要仪器 | 第33页 |
| 3.2 试验方法 | 第33-38页 |
| 3.2.1 重组质粒的构建及鉴定 | 第33-35页 |
| 3.2.2 TsPKA-r的原核表达 | 第35-36页 |
| 3.2.3 TsPKA-r蛋白纯化 | 第36页 |
| 3.2.4 TsPKA-r的Western blotting | 第36页 |
| 3.2.5 基于TsPKA-r的间接ELISA方法的建立 | 第36-37页 |
| 3.2.6 间接ELISA条件的优化 | 第37-38页 |
| 3.2.7 间接ELISA阳性临界值确定 | 第38页 |
| 3.2.8 交叉反应检测 | 第38页 |
| 3.3 试验结果 | 第38-45页 |
| 3.3.1 重组质粒的构建及鉴定 | 第38-39页 |
| 3.3.2 TsPKA-r的原核表达及纯化 | 第39页 |
| 3.3.3 TsPKA-r的Western blotting | 第39-40页 |
| 3.3.4 间接ELISA条件的优化 | 第40-42页 |
| 3.3.5 ELISA操作步骤优化结果 | 第42-43页 |
| 3.3.6 间接ELISA阳性临界值确定 | 第43-44页 |
| 3.3.7 交叉反应检测 | 第44-45页 |
| 3.4 讨论 | 第45-47页 |
| 第四章 Tspka-c基因的真核表达及组织分布 | 第47-58页 |
| 4.1 试验材料 | 第47页 |
| 4.1.1 实验动物及血清 | 第47页 |
| 4.1.2 菌株、载体及试剂 | 第47页 |
| 4.1.3 主要仪器 | 第47页 |
| 4.2 试验方法 | 第47-51页 |
| 4.2.1 重组质粒pPIC9K -Tspka-c的构建 | 第47-48页 |
| 4.2.2 重组质粒pPIC9K-Tspka-c的线性化 | 第48页 |
| 4.2.3 酵母感受态细胞的制备 | 第48页 |
| 4.2.4 转化与菌落筛选 | 第48-49页 |
| 4.2.5 重组蛋白TsPKA-c的诱导表达 | 第49页 |
| 4.2.6 重组蛋白TsPKA-c纯化及鉴定 | 第49页 |
| 4.2.7 免疫组化试验 | 第49-51页 |
| 4.3 试验结果 | 第51-57页 |
| 4.3.1 重组质粒pPIC9K-Tspka-c的线性化 | 第51-52页 |
| 4.3.2 重组蛋白TsPKA-c的诱导表达 | 第52-53页 |
| 4.3.3 重组蛋白TsPKA-c纯化及鉴定 | 第53-55页 |
| 4.3.4 血清效价的测定 | 第55页 |
| 4.3.5 抗体特异性检测 | 第55-56页 |
| 4.3.6 免疫组化分析 | 第56-57页 |
| 4.4 讨论 | 第57-58页 |
| 第五章 TsPKA-c酶动力学及抑制动力学分析 | 第58-67页 |
| 5.1 试验材料 | 第58页 |
| 5.1.1 虫株 | 第58页 |
| 5.1.2 主要试剂 | 第58页 |
| 5.1.3 主要仪器 | 第58页 |
| 5.2 试验方法 | 第58-60页 |
| 5.2.1 酶动力学测定原理 | 第58页 |
| 5.2.2 TsPKA-c的活性测定步骤 | 第58-59页 |
| 5.2.3 酶活性测定条件优化及酶活力计算 | 第59页 |
| 5.2.4 Km值和Vmax计算 | 第59页 |
| 5.2.5 TsPKA-c酶抑制动力学分析 | 第59-60页 |
| 5.2.6 体外培养虫体的抑制实验 | 第60页 |
| 5.3 试验结果 | 第60-66页 |
| 5.3.1 酶活性测定条件优化 | 第60-61页 |
| 5.3.2 TsPKA-c酶活性测定 | 第61-62页 |
| 5.3.3 Km值和Vmax计算 | 第62-63页 |
| 5.3.4 抑制剂对TsPKA-c酶活性影响 | 第63-64页 |
| 5.3.5 体外虫体抑制实验 | 第64-66页 |
| 5.4 讨论 | 第66-67页 |
| 第六章 全文结论 | 第67-68页 |
| 参考文献 | 第68-73页 |
| 致谢 | 第73-74页 |
| 作者简历 | 第74页 |
