| 摘要 | 第3-5页 |
| Abstract | 第5-6页 |
| 1 绪论 | 第10-21页 |
| 1.1 二色补血草简介 | 第10页 |
| 1.2 植物病害研究现状 | 第10-14页 |
| 1.2.1 林木病虫害造成的经济损失和环境影响 | 第10-13页 |
| 1.2.2 植物病害防治研究动态 | 第13-14页 |
| 1.3 植物几丁质酶性质及在真菌病害防治中的应用 | 第14-18页 |
| 1.3.1 几丁质酶的分类 | 第14-15页 |
| 1.3.2 植物几丁质酶的生物学特性 | 第15-16页 |
| 1.3.3 几丁质酶在植物真菌病害生物防治中的应用 | 第16-18页 |
| 1.4 重组酶表达系统的选择与研究现状 | 第18-20页 |
| 1.5 本项研究的目的及意义 | 第20-21页 |
| 2 几丁质酶基因chi31及chi32的克隆及生物信息学分析 | 第21-31页 |
| 2.1 几丁质酶基因chi31的克隆及生物信息学分析 | 第21-25页 |
| 2.1.1 chi31基因的cDNA及DNA克隆 | 第21页 |
| 2.1.2 chi31基因的生物信息学分析 | 第21-23页 |
| 2.1.3 chi31基因的多序列比对 | 第23-25页 |
| 2.2 几丁质酶基因chi32的克隆及生物信息学分析 | 第25-29页 |
| 2.2.1 chi32基因的cDNA及DNA的克隆 | 第25页 |
| 2.2.2 chi32基因的生物信息学分析 | 第25-27页 |
| 2.2.3 chi32基因的多序列比对 | 第27-29页 |
| 2.3 几丁质酶chi31及chi32比较 | 第29-30页 |
| 2.4 本章小结 | 第30-31页 |
| 3 植物病原真菌胁迫下chi31及chi32的表达差异 | 第31-42页 |
| 3.1 材料 | 第31页 |
| 3.1.1 植物材料及菌株 | 第31页 |
| 3.1.2 定量PCR引物 | 第31页 |
| 3.1.3 常用试剂 | 第31页 |
| 3.2 实验方法 | 第31-35页 |
| 3.2.1 尖孢镰刀菌胁迫下二色补血草几丁质酶基因的表达 | 第31-34页 |
| 3.2.2 叶部病害胁迫下二色补血草几丁质酶基因的表达 | 第34-35页 |
| 3.3 结果与分析 | 第35-39页 |
| 3.3.1 二色补血草总RNA的提取和纯化 | 第35-36页 |
| 3.3.2 反转录后的PCR检测 | 第36页 |
| 3.3.3 尖孢镰刀菌胁迫下二色补血草根部和叶部cDNA荧光定量PCR结果 | 第36-38页 |
| 3.3.4 叶部病害胁迫后两基因在叶部的表达情况 | 第38-39页 |
| 3.4 讨论 | 第39-41页 |
| 3.4.1 二色补血草RNA提取方法的讨论 | 第39-40页 |
| 3.4.2 叶部病害分离、鉴定的讨论 | 第40页 |
| 3.4.3 几丁质酶基因与抗真菌病害的相关性 | 第40-41页 |
| 3.5 本章小结 | 第41-42页 |
| 4 几丁质酶基因chi31和chi32在毕赤酵母中的表达 | 第42-74页 |
| 4.1 实验材料 | 第42-45页 |
| 4.1.1 菌株与载体 | 第42页 |
| 4.1.2 酶和引物 | 第42页 |
| 4.1.3 酶活测定试剂 | 第42-43页 |
| 4.1.4 SDS-PAGE试剂 | 第43页 |
| 4.1.5 培养基 | 第43-44页 |
| 4.1.6 常用试剂 | 第44页 |
| 4.1.7 主要仪器设备 | 第44-45页 |
| 4.2 实验方法 | 第45-55页 |
| 4.2.1 胞外表达质粒pPIC9-chi31,pPIC9-chi32的构建及其鉴定 | 第45-49页 |
| 4.2.2 几丁质酶基因chi31,chi32转化整合酵母细胞 | 第49-52页 |
| 4.2.3 酵母转化子细胞的培养与诱导 | 第52页 |
| 4.2.4 SDS-PAGE凝胶电泳分析 | 第52-53页 |
| 4.2.5 重组几丁质酶的部分酶学特性的研究 | 第53-54页 |
| 4.2.6 重组酶粗酶液抗病原真菌的初步研究 | 第54-55页 |
| 4.3 结果与分析 | 第55-69页 |
| 4.3.1 载体与目的基因的双酶切 | 第55-56页 |
| 4.3.2 大肠杆菌重组质粒的PCR筛选和双酶切鉴定 | 第56-58页 |
| 4.3.3 几丁质酶基因转化整合酵母细胞 | 第58-61页 |
| 4.3.4 SDS-PAGE凝胶电泳分析 | 第61-62页 |
| 4.3.5 重组几丁质酶的部分酶学特性的研究 | 第62-67页 |
| 4.3.6 重组几丁质酶对不同真菌细胞壁的水解作用 | 第67-69页 |
| 4.4 讨论 | 第69-72页 |
| 4.4.1 重组载体转化毕赤酵母方法的选择和条件的优化 | 第69-70页 |
| 4.4.2 筛选GS115转化子两种Mut表型 | 第70页 |
| 4.4.3 重组转化子的筛选原则 | 第70页 |
| 4.4.4 摇瓶培养毕赤酵母原则 | 第70-71页 |
| 4.4.5 表达的二色补血草几丁质酶大小探讨 | 第71页 |
| 4.4.6 关于几丁质酶的活力测定的方法选择及原则 | 第71页 |
| 4.4.7 提高重组几丁质酶抗病原能力的讨论 | 第71-72页 |
| 4.4.8 重组蛋白CHI31、CHI32的生物活性比较的讨论 | 第72页 |
| 4.4.9 重组蛋白CHI31、CHI32降解卵菌细胞壁的讨论 | 第72页 |
| 4.5 本章小结 | 第72-74页 |
| 结论 | 第74-76页 |
| 参考文献 | 第76-82页 |
| 附录 | 第82-83页 |
| 攻读学位期间发表的学术论文 | 第83-84页 |
| 致谢 | 第84-85页 |
