| 中文摘要 | 第4-6页 |
| 英文摘要 | 第6页 |
| 英文缩略词 | 第8-11页 |
| 1 绪论 | 第11-15页 |
| 1．1 引言 | 第11页 |
| 1．2 基因工程药物生产的基本过程 | 第11-13页 |
| 1．3 国内外研究概况 | 第13-14页 |
| 1．4 研究目的和内容 | 第14-15页 |
| 2 材料与方法 | 第15-27页 |
| 2．1 菌株与质粒 | 第15页 |
| 2．2 主要仪器 | 第15-16页 |
| 2．3 主要试剂 | 第16-19页 |
| 2．4 引物的设计与合成 | 第19页 |
| 2．5 目的cDNA与质粒pET-21a（+）的大片段连接 | 第19-20页 |
| 2．6 连接产物用CaCl2法转化大肠杆菌DH5α | 第20-21页 |
| 2．7 限制性内切酶初步鉴定重组质粒pET-21a（+）/NIF | 第21-22页 |
| 2．8 大量抽提重组质粒pET-21a（+）/NIF | 第22-23页 |
| 2．9 DNA序列分析 | 第23页 |
| 2．10 重组质粒用CaCl2法转化大肠杆菌BL21（DE3）plysS | 第23页 |
| 2．11 rNIF在大肠杆菌BL21（DE3）plysS中表达 | 第23-24页 |
| 2．12 rNIF的发酵 | 第24页 |
| 2．13 rNIF的纯化 | 第24-25页 |
| 2．14 rNIF纯品的分子量分析 | 第25页 |
| 2．15 rNIF纯品的纯度分析 | 第25页 |
| 2．16 rNIF活性测定 | 第25-26页 |
| 2．17 Bradford法测定蛋白质含量 | 第26-27页 |
| 3 结果 | 第27-35页 |
| 3．1 PCR扩增目的cDNA的结果 | 第27页 |
| 3．2 初步鉴定重组质粒pET-21a（+）/NIF的结果 | 第27-28页 |
| 3．3 目的cDNA序列分析的结果 | 第28-29页 |
| 3．4 CaCl2法转化大肠杆菌DH5α和BL21（DE3）plysS的结果 | 第29页 |
| 3．5 rNIF在大肠杆菌BL21（DE3）plysS中表达的结果 | 第29-30页 |
| 3．6 rNIF的纯化结果 | 第30-33页 |
| 3．7 rNIF纯品的分子量分析结果 | 第33页 |
| 3．8 rNIF纯品的纯度分析结果 | 第33-34页 |
| 3．9 rNIF的活性测定结果 | 第34-35页 |
| 4 讨论 | 第35-41页 |
| 4．1 聚合酶链式反应的忠实性 | 第35页 |
| 4．2 表达载体和宿主菌的选择 | 第35-36页 |
| 4．3 外源基因导入宿主菌的方法 | 第36-37页 |
| 4．4 影响外源蛋白在宿主菌中表达的因素 | 第37页 |
| 4．5 重组质粒稳定性的控制 | 第37-38页 |
| 4．6 包涵体的溶解与复性 | 第38-39页 |
| 4．7 纯化方法的选择 | 第39-40页 |
| 4．8 活性测定结果的比较及分析 | 第40-41页 |
| 5 结论及后续工作 | 第41-42页 |
| 致谢 | 第42-43页 |
| 参考文献 | 第43-45页 |
