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毛竹抗病PheWRKY1基因的克隆与功能分析

摘要第1-7页
ABSTRACT第7-15页
第一章 绪论第15-25页
   ·研究背景第15-22页
   ·本研究的目的与意义第22-23页
   ·研究的主要内容第23-24页
   ·技术路线第24-25页
第二章 研究材料与方法第25-48页
   ·实验材料第25-29页
     ·植物材料第25页
     ·菌株和载体第25-26页
     ·主要试剂第26页
     ·使用软件第26-27页
     ·主要使用仪器第27-28页
     ·引物第28-29页
   ·实验方法第29-48页
     ·目的基因的选择第29页
     ·毛竹叶片总RNA 提取与cDNA 第一链合成第29-30页
     ·PCR 反应体系及产物的琼脂糖电泳第30-31页
     ·PCR 产物回收第31页
     ·PCR 产物与pMD18-T 载体的连接第31-32页
     ·连接产物转化大肠杆菌感受态细胞第32-34页
     ·重组质粒的菌液PCR 鉴定第34页
     ·质粒DNA 的小量提取与酶切分析第34-36页
     ·序列的测定与分析第36页
     ·不同处理对PheWRKY1 基因转录水平表达的影响第36-39页
     ·植物过表达载体构建第39-40页
     ·菌种保藏第40页
     ·根癌农杆菌感受态细胞的制备第40-41页
     ·重组质粒转化根癌农杆菌感受态细胞(电击法)第41页
     ·农杆菌菌液PCR 鉴定第41页
     ·拟南芥培养第41-42页
     ·农杆菌介导的拟南芥转化第42页
     ·拟南芥的抗性筛选第42-43页
     ·转基因拟南芥基因组DNA 检测第43-44页
     ·拟南芥种子萌发与表型观察第44页
     ·细菌培养与拟南芥接种第44-45页
     ·拟南芥病程相关基因表达变化第45页
     ·拟南芥光合作用相关的叶绿素荧光参数差异第45-46页
     ·原核表达载体构建与PheWRKY1 蛋白的制备第46-48页
第三章 结果与分析第48-73页
   ·基因片段的克隆第48-49页
   ·生物信息学分析第49-54页
     ·蛋白序列聚类分析、保守性分析与蛋白三级结构预测第49-51页
     ·亚细胞定位分析第51页
     ·跨膜结构域分析第51-52页
     ·蛋白信号肽预测第52-53页
     ·蛋白功能预测第53-54页
   ·不同处理下PheWRKY1 基因的表达模式分析第54-61页
     ·毛竹总RNA 的提取与反转录第54-55页
     ·引物特异性检测第55页
     ·实时荧光定量PCR 扩增曲线和溶解曲线分析第55-58页
     ·几种处理在转录水平对PheWRKY1 基因表达的调控第58-60页
     ·自然发病林感病植株基因表达分析第60-61页
   ·目的基因原核表达第61-62页
   ·利用转基因拟南芥对目的基因进行功能分析第62-73页
     ·转基因拟南芥植株的获得第62-64页
     ·拟南芥T_2 代植株表型观察第64-65页
     ·DC3000 侵染对拟南芥表型特征的影响第65页
     ·DC3000 侵染后拟南芥光合荧光特性的变化第65-69页
     ·病程相关基因表达的变化第69-73页
第四章 结论与讨论第73-78页
   ·结论第73-74页
   ·讨论第74-77页
   ·展望第77-78页
参考文献第78-86页
附录第86-91页
在读期间的学术研究第91-93页
致谢第93页

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