摘要 | 第4-7页 |
ABSTRACT | 第7-9页 |
缩写词表(Abbreviations) | 第13-14页 |
第一章 绪论 | 第14-27页 |
1. 研究目的与意义 | 第14页 |
2. 国内外研究现状 | 第14-25页 |
2.1 脂多糖引起免疫应激性炎症的研究进展 | 第14-15页 |
2.2 NF-κB信号通路的研究进展 | 第15-16页 |
2.3 炎性小体的研究进展 | 第16-23页 |
2.3.1 炎性小体的组成和结构 | 第17-18页 |
2.3.2 炎性小体的激活及分子机制 | 第18-19页 |
2.3.3 NLRP3信号通路的研究进展 | 第19-23页 |
2.4 黄芩苷的研究进展 | 第23-25页 |
2.4.1 黄芩苷的理化性质 | 第23页 |
2.4.2 黄芩苷的药理作用 | 第23-25页 |
3. 脂多糖诱导对仔猪NF-κB和NLRP3信号通路的激活 | 第25页 |
4. 小结与展望 | 第25-27页 |
第二章 试验研究 | 第27-56页 |
试验一:黄芩苷对脂多糖诱导仔猪外周血单核细胞NF-κB信号通路的影响 | 第27-39页 |
1. 材料与方法 | 第27-34页 |
1.1 材料 | 第27-29页 |
1.1.1 试验药品与试剂 | 第27-28页 |
1.1.2 仪器设备 | 第28页 |
1.1.3 引物设计数据库及分析软件 | 第28-29页 |
1.1.4 试验用品的处理 | 第29页 |
1.2 试验动物 | 第29-30页 |
1.3 试剂配制 | 第30-31页 |
1.4 试验设计 | 第31页 |
1.5 外周血单核细胞的分离及培养方法 | 第31-32页 |
1.6 外周血单核细胞的细胞核和胞浆内NF-κB p65活性测定 | 第32页 |
1.7 外周血单核细胞上清液中TNF-α 及IL-6 的蛋白表达量 | 第32页 |
1.8 引物设计 | 第32-33页 |
1.9 外周血单核细胞中TNF-α 及IL-6 的m RNA表达量 | 第33页 |
1.10 统计学分析 | 第33-34页 |
2. 结果 | 第34-37页 |
2.1 黄芩苷对脂多糖诱导后NF-κB p65转录因子核转移的影响 | 第34页 |
2.2 黄芩苷对仔猪外周血单核细胞分泌TNF-α 及IL-6 蛋白的影响 | 第34-35页 |
2.2.1 黄芩苷对脂多糖诱导后培养上清液中TNF-α 的蛋白含量 | 第34-35页 |
2.2.2 黄芩苷对脂多糖诱导后培养上清液中IL-6 的蛋白含量 | 第35页 |
2.3 黄芩苷对仔猪外周血单核细胞TNF-α 及IL-6 m RNA表达的影响 | 第35-37页 |
2.3.1 黄芩苷对脂多糖诱导的单核细胞内TNF-α 的m RNA表达的影响 | 第35-36页 |
2.3.2 黄芩苷对脂多糖诱导的单核细胞内IL-6 的m RNA表达的影响 | 第36-37页 |
3. 讨论 | 第37-38页 |
3.1 脂多糖刺激对仔猪外周血单核细胞NF-κB信号通路的影响 | 第37-38页 |
3.2 黄芩苷对脂多糖诱导仔猪外周血单核细胞NF-κB信号通路的影响 | 第38页 |
4. 小结 | 第38-39页 |
试验二:黄芩苷对脂多糖诱导仔猪外周血单核细胞NLRP3信号通路的影响 | 第39-56页 |
1. 材料与方法 | 第39-43页 |
1.1 材料 | 第39-40页 |
1.1.1 试验药品与试剂 | 第39-40页 |
1.1.2 仪器设备 | 第40页 |
1.2 试验动物 | 第40页 |
1.3 试验设计 | 第40页 |
1.4 细胞活性氧水平 | 第40页 |
1.5 细胞上清液中IL-1β 及IL-18的蛋白表达量 | 第40-41页 |
1.6 引物设计 | 第41页 |
1.7 细胞中NLRP3、ASC、Caspase-1、IL-1β 及IL-18的m RNA表达量 | 第41-42页 |
1.7.1 总RNA的提取 | 第41页 |
1.7.2 逆转录 | 第41-42页 |
1.7.3 PCR扩增、电泳与定量 | 第42页 |
1.8 细胞中Cleaved Caspase-1 p20的蛋白表达量 | 第42页 |
1.9 黄芩苷对脂多糖诱导后细胞凋亡的影响 | 第42页 |
1.10 统计学分析 | 第42-43页 |
2. 结果 | 第43-53页 |
2.1 黄芩苷对脂多糖诱导后仔猪外周血单核细胞活性氧的影响 | 第43-44页 |
2.2 黄芩苷对仔猪外周血单核细胞IL-1β 及IL-18表达的影响 | 第44-47页 |
2.2.1 黄芩苷对脂多糖诱导后细胞培养上清液中IL-1β、IL-18蛋白表达的影响 | 第44-45页 |
2.2.2 黄芩苷对脂多糖诱导后单核细胞内IL-1β、IL-18的m RNA表达的影响 | 第45-47页 |
2.3 黄芩苷对仔猪外周血单核细胞NLRP3、ASC和Caspase-1 的m RNA表达量 | 第47-50页 |
2.3.1 黄芩苷对脂多糖诱导后单核细胞内NLRP3的m RNA表达的影响 | 第47-48页 |
2.3.2 黄芩苷对脂多糖诱导后单核细胞内ASC的m RNA表达的影响 | 第48-49页 |
2.3.3 黄芩苷对脂多糖诱导后单核细胞内Caspase-1 的m RNA表达的影响 | 第49-50页 |
2.4 黄芩苷对脂多糖诱导后单核细胞中Cleaved Caspase-1p20蛋白表达的影响 | 第50-51页 |
2.5 黄芩苷对脂多糖诱导后中、晚期细胞凋亡的影响 | 第51-53页 |
2.5.1 黄芩苷对脂多糖诱导 3h后中、晚期细胞凋亡的影响 | 第51-52页 |
2.5.2 黄芩苷对脂多糖诱导 6h后中、晚期细胞凋亡的影响 | 第52-53页 |
3. 讨论 | 第53-55页 |
3.1 脂多糖诱导对仔猪外周血单核细胞NLRP3信号通路的影响 | 第53-54页 |
3.2 黄芩苷对脂多糖诱导仔猪外周血单核细胞NLRP3信号通路的影响 | 第54页 |
3.3 黄芩苷对脂多糖诱导的细胞中Caspase-1 蛋白活性的影响 | 第54页 |
3.4 黄芩苷对NLRP3信号通路介导的IL-1β、IL-18表达的影响 | 第54-55页 |
3.5 黄芩苷对脂多糖诱导仔猪外周血单核细胞活性氧的影响 | 第55页 |
3.6 黄芩苷对脂多糖诱导的细胞凋亡的影响 | 第55页 |
4. 小结 | 第55-56页 |
第三章 结论与建议 | 第56-57页 |
1. 主要结论 | 第56页 |
2. 创新点 | 第56页 |
3. 有待进一步研究的问题 | 第56-57页 |
参考文献 | 第57-64页 |
致谢 | 第64-65页 |
攻读硕士学位阶段研究成果 | 第65-66页 |
附录 | 第66-81页 |
附录一:ELISA试剂盒检测 | 第66-72页 |
附录二:RT-PCR检测 | 第72-76页 |
附录三:ROS观察 | 第76-77页 |
附录四:细胞凋亡观察 | 第77-79页 |
附录五:Western blot检测 | 第79-81页 |