| 摘要 | 第5-7页 |
| Abstract | 第7-9页 |
| 英文缩略表 | 第13-15页 |
| 1 引言 | 第15-23页 |
| 1.1 研究背景及意义 | 第15-16页 |
| 1.2 研究现状 | 第16-19页 |
| 1.2.1 抗菌肽的研究进展 | 第16-17页 |
| 1.2.2 肺表面活性蛋白B的生理活性研究进展 | 第17-19页 |
| 1.2.3 肺表面活性蛋白B前肽（proSP-B）的研究进展 | 第19页 |
| 1.3 研究目的及意义 | 第19-20页 |
| 1.4 研究内容及技术路线 | 第20-23页 |
| 2 肺表面活性蛋白B前肽proSP-B表达载体的构建及表达 | 第23-37页 |
| 2.1 材料与仪器 | 第23-24页 |
| 2.1.1 主要材料 | 第23页 |
| 2.1.2 主要试剂 | 第23-24页 |
| 2.1.3 主要仪器 | 第24页 |
| 2.2 实验方法 | 第24-30页 |
| 2.2.1 大鼠肺组织总RNA提取 | 第24页 |
| 2.2.2 proSP-B基因cDNA的获得及扩增 | 第24-26页 |
| 2.2.3 pET30-proSP-B表达载体的构建、鉴定 | 第26-27页 |
| 2.2.4 pGEX4T1proSP-B表达载体的构建、鉴定 | 第27-28页 |
| 2.2.5 proSP-B诱导表达及SDS-PAGE检测 | 第28-29页 |
| 2.2.6 Western Blot检测proSP-B的表达 | 第29页 |
| 2.2.7 GST-proSP-B蛋白的纯化 | 第29-30页 |
| 2.3 结果与分析 | 第30-35页 |
| 2.3.1 RNA与RT-PCR电泳鉴定 | 第30页 |
| 2.3.2 pET30-proSP-B载体构建与鉴定 | 第30-31页 |
| 2.3.3 pGEX4T1proSP-B载体构建与鉴定 | 第31-32页 |
| 2.3.4 proSP-B蛋白的表达分析 | 第32-33页 |
| 2.3.5 Western Blot的结果分析 | 第33-34页 |
| 2.3.6 proSP-B蛋白的纯化 | 第34-35页 |
| 2.4 结论与讨论 | 第35-37页 |
| 3 proSP-B蛋白的细胞定位及毒性研究 | 第37-49页 |
| 3.1 材料与仪器 | 第37-38页 |
| 3.1.1 主要试剂材料 | 第37页 |
| 3.1.2 主要仪器 | 第37-38页 |
| 3.2 实验方法 | 第38-43页 |
| 3.2.1 pEGFP-N2-proSP-B重组质粒的构建及鉴定 | 第38-40页 |
| 3.2.2 细胞培养实验准备 | 第40-41页 |
| 3.2.3 CCL149细胞株的培养 | 第41页 |
| 3.2.4 细胞转染条件优化 | 第41-42页 |
| 3.2.5 GFP与GFP-proSP-B的细胞荧光定位 | 第42页 |
| 3.2.6 proSP-B蛋白的细胞毒性实验研究 | 第42-43页 |
| 3.3 结果与分析 | 第43-46页 |
| 3.3.1 pEGFP-N2-proSP-B重组质粒的构建及鉴定 | 第43页 |
| 3.3.2 CCL149细胞的培养 | 第43-44页 |
| 3.3.3 脂质体转染条件优化 | 第44页 |
| 3.3.4 GFP荧光蛋白在CCL149细胞中的定位分析 | 第44页 |
| 3.3.5 proSP-B蛋白在CCL149细胞中的荧光定位分析 | 第44-45页 |
| 3.3.6 proSP-B蛋白的细胞毒性分析 | 第45-46页 |
| 3.4 结论与讨论 | 第46-49页 |
| 4 proSP-B蛋白的抗菌活性及抗菌机理初步研究 | 第49-61页 |
| 4.1 材料与仪器 | 第49-50页 |
| 4.1.1 主要试剂材料 | 第49页 |
| 4.1.2 主要仪器 | 第49-50页 |
| 4.2 实验方法 | 第50-53页 |
| 4.2.1 培养基的配制 | 第50页 |
| 4.2.2 试剂的配制 | 第50页 |
| 4.2.3 实验菌种的活化及菌悬液的制备 | 第50-51页 |
| 4.2.4 proSP-B蛋白抑菌实验pH值的优化 | 第51-52页 |
| 4.2.5 proSP-B蛋白的抗菌谱测定 | 第52页 |
| 4.2.6 proSP-B蛋白最小抑菌浓度（MIC）的测定 | 第52-53页 |
| 4.2.7 proSP-B蛋白的抗菌机理研究 | 第53页 |
| 4.3 结果与分析 | 第53-59页 |
| 4.3.1 筛选proSP-B蛋白最优的反应缓冲液 | 第53-55页 |
| 4.3.2 抗菌谱的测定结果 | 第55-57页 |
| 4.3.3 蛋白最小抑菌浓度的测定 | 第57页 |
| 4.3.4 proSP-B蛋白的抗菌机理研究 | 第57-59页 |
| 4.4 结论与讨论 | 第59-61页 |
| 5 总结与展望 | 第61-65页 |
| 5.1 总结 | 第61-62页 |
| 5.2 展望 | 第62-65页 |
| 致谢 | 第65-67页 |
| 参考文献 | 第67-71页 |
| 附录 | 第71-72页 |
