| 摘要 | 第3-4页 |
| Summary | 第4页 |
| 主要缩略词英汉对照表 | 第8-10页 |
| 第一章 引言 | 第10-15页 |
| 1.1 弓形虫病 | 第10页 |
| 1.2 黏膜免疫系统概述 | 第10页 |
| 1.3 活载体疫苗 | 第10-11页 |
| 1.3.1 乳酸菌和乳酸杆菌的益生作用 | 第11页 |
| 1.3.2 乳酸杆菌活载体疫苗的优点 | 第11页 |
| 1.4 弓形虫病疫苗的研究进展 | 第11-14页 |
| 1.4.1 灭活疫苗 | 第12页 |
| 1.4.2 弱毒疫苗 | 第12页 |
| 1.4.3 DNA疫苗 | 第12-13页 |
| 1.4.4 基因缺失疫苗 | 第13页 |
| 1.4.5 亚单位疫苗 | 第13页 |
| 1.4.6 活载体疫苗 | 第13-14页 |
| 1.5 总结与展望 | 第14-15页 |
| 第二章 弓形虫重组表达质粒的构建 | 第15-27页 |
| 2.1 材料与方法 | 第15-24页 |
| 2.1.1 材料 | 第15-18页 |
| 2.1.1.1 工具酶和主要试剂 | 第15页 |
| 2.1.1.2 主要仪器设备 | 第15-16页 |
| 2.1.1.3 主要试剂 | 第16页 |
| 2.1.1.4 试剂配制 | 第16-17页 |
| 2.1.1.5 引物 | 第17-18页 |
| 2.1.2 方法 | 第18-24页 |
| 2.1.2.1 DNA的提取 | 第18页 |
| 2.1.2.2 PCR扩增ROP18和SAG1基因的PCR扩增体系 | 第18-19页 |
| 2.1.2.3 ROP18和SAG1基因PCR扩增产物的琼脂糖电泳分析 | 第19页 |
| 2.1.2.4 ROP18和SAG1基因PCR扩增产物的凝胶回收和纯化 | 第19-20页 |
| 2.1.2.5 ROP18和SAG1基因PCR扩增产物的连接 | 第20页 |
| 2.1.2.6 重组质粒ROP18/T、SAG1/T的转化 | 第20-21页 |
| 2.1.2.7 提取重组质粒T-ROP18、T-SAG1 | 第21页 |
| 2.1.2.8 感受态细胞（JM109）的制备 | 第21页 |
| 2.1.2.9 重组质粒T-ROP18、T-SAG1在感受态细胞（JM109）中的转化 | 第21-22页 |
| 2.1.2.10 菌液PCR鉴定 | 第22页 |
| 2.1.2.11 提取表达载体质粒p SIP409 | 第22页 |
| 2.1.2.12 ROP18、SAG1基因和p SIP409表达载体双酶切片段的回收 | 第22页 |
| 2.1.2.13 重组质粒p SIP409-ROP18和p SIP409-SAG1的构建 | 第22-23页 |
| 2.1.2.14 目的基因ROP18、SAG1与p SIP409质粒的连接 | 第23-24页 |
| 2.1.2.15 重组质粒p SIP409-ROP18、p SIP409-SAG1的转化 | 第24页 |
| 2.1.2.16 重组质粒p SIP409-ROP18、p SIP409-SAG1的PCR鉴定 | 第24页 |
| 2.1.2.17 重组质粒p SIP409-ROP18、p SIP409-SAG1的提取 | 第24页 |
| 2.1.2.18 重组质粒p SIP409-ROP18、p SIP409-SAG1的双酶切鉴定 | 第24页 |
| 2.2 结果 | 第24-25页 |
| 2.2.1 目的基因的鉴定结果 | 第24-25页 |
| 2.3 讨论 | 第25-27页 |
| 第三章 弓形虫重组表达质粒在乳酸杆菌Nc8中的表达 | 第27-35页 |
| 3.1 材料与方法 | 第27-32页 |
| 3.1.1 材料 | 第27-30页 |
| 3.1.1.1 菌种 | 第27页 |
| 3.1.1.2 主要仪器设备 | 第27页 |
| 3.1.1.3 试剂的配置 | 第27-30页 |
| 3.1.2 方法 | 第30-32页 |
| 3.1.2.1 乳酸菌Nc8感受态的制备 | 第30页 |
| 3.1.2.2 乳酸菌的电转化 | 第30-31页 |
| 3.1.2.3 乳酸菌质粒的提取 | 第31页 |
| 3.1.2.4 重组乳酸菌的诱导表达及SDS-PAGE分析 | 第31-32页 |
| 3.1.2.5 重组乳酸菌Western blot分析 | 第32页 |
| 3.2 结果 | 第32-34页 |
| 3.2.1 重组乳酸杆菌菌液PCR鉴定 | 第32-33页 |
| 3.2.2 重组乳酸杆菌的SDS-PAGE结果鉴定 | 第33页 |
| 3.2.3 重组乳酸杆菌的Western blot结果鉴定 | 第33-34页 |
| 3.3 讨论 | 第34-35页 |
| 3.3.1 电转化方法的确定 | 第34页 |
| 3.3.2 重组乳酸杆菌表达蛋白的条件优化 | 第34页 |
| 3.3.3 重组乳酸杆菌的SDS-PAGE和Western blot结果分析 | 第34-35页 |
| 第四章 重组乳酸杆菌对小白鼠黏膜免疫的效果研究 | 第35-47页 |
| 4.1 材料与方法 | 第35-39页 |
| 4.1.1 材料 | 第35-36页 |
| 4.1.1.1 试验动物 | 第35页 |
| 4.1.1.2 主要仪器及设备 | 第35页 |
| 4.1.1.3 主要试剂及配制方法 | 第35-36页 |
| 4.1.2 方法 | 第36-39页 |
| 4.1.2.1 试验动物分组及免疫 | 第36页 |
| 4.1.2.2 小鼠血清的制备 | 第36页 |
| 4.1.2.3 小鼠肺脏和小肠浸出液的制备 | 第36页 |
| 4.1.2.4 血清中Ig G抗体及Ig G1、Ig G2a抗体亚类的检测 | 第36-37页 |
| 4.1.2.5 试验小鼠脾淋巴细胞悬液的制备 | 第37-38页 |
| 4.1.2.6 试验小鼠脾淋巴细胞增殖试验（MTT法） | 第38页 |
| 4.1.2.7 细胞因子IFN-γ、IL2、IL4和IL10的检测 | 第38页 |
| 4.1.2.8 脾脏CD3+CD4+CD8-和CD3+CD8+CD4-细胞的检测 | 第38-39页 |
| 4.1.2.9 肺脏和小肠中s Ig A的检测 | 第39页 |
| 4.1.2.10 免疫保护力试验-----腹腔注射感染弓形虫RH珠 | 第39页 |
| 4.2 结果 | 第39-45页 |
| 4.2.1 试验鼠血清中抗体Ig G和抗体亚类Ig G1、Ig G2a的分布情况 | 第39-41页 |
| 4.2.1.1 免疫期间试验鼠血清中Ig G的分布情况 | 第39-40页 |
| 4.2.1.2 试验鼠血清中Ig G1、Ig G2a的分布情况 | 第40-41页 |
| 4.2.2 脾淋巴细胞增殖试验的结果 | 第41页 |
| 4.2.3 细胞因子IFN-γ、IL2、IL4、IL10的检测 | 第41-43页 |
| 4.2.3.1 细胞因子标准曲线的绘制 | 第41-42页 |
| 4.2.3.2 各细胞因子检测结果 | 第42-43页 |
| 4.2.3.2.1 IFN-γ检测结果 | 第42页 |
| 4.2.3.2.2 IL2检测结果 | 第42页 |
| 4.2.3.2.3 IL4检测结果 | 第42页 |
| 4.2.3.2.4 IL10检测结果 | 第42-43页 |
| 4.2.4 流式细胞分选仪分析CD3+CD4+CD8-和CD3+CD8+CD4-细胞 | 第43-44页 |
| 4.2.5 肺脏和小肠中s Ig A的检测结果 | 第44-45页 |
| 4.2.6 试验鼠腹腔注射弓形虫RH株的效果评价 | 第45页 |
| 4.3 讨论 | 第45-47页 |
| 第五章 全文结论 | 第47-48页 |
| 参考文献 | 第48-54页 |
| 致谢 | 第54-55页 |
| 作者简历 | 第55-56页 |
| 导师简介 | 第56-58页 |
