| 中文摘要 | 第12-14页 |
| 英文摘要 | 第14-15页 |
| 第一章 前言 | 第16-27页 |
| 1.1 掷孢酵母 | 第16-17页 |
| 1.2 类胡萝卜素 | 第17-21页 |
| 1.2.1 类胡萝卜素概述 | 第17-18页 |
| 1.2.2 类胡萝卜素的生物合成 | 第18-19页 |
| 1.2.3 主要类胡萝卜素的应用价值 | 第19-21页 |
| 1.3 类胡萝卜素合成关键酶 | 第21-23页 |
| 1.3.1 GGPP合成酶 | 第21页 |
| 1.3.2 八氢番茄红素合成酶和番茄红素环化酶 | 第21-22页 |
| 1.3.3 八氢番茄红素脱氢酶 | 第22-23页 |
| 1.3.4 类胡萝卜素合成途径中其它关键酶 | 第23页 |
| 1.4 掷孢酵母类胡萝卜素关键酶亚细胞定位预测 | 第23-24页 |
| 1.5 本研究的思路和策略 | 第24-27页 |
| 1.5.1 前期研究进展 | 第24-25页 |
| 1.5.2 技术路线 | 第25页 |
| 1.5.3 研究目的和内容 | 第25-27页 |
| 第二章 掷孢酵母类胡萝卜素合成关键酶CrtYB功能位点分析 | 第27-51页 |
| 2.1 引言 | 第27页 |
| 2.2 材料 | 第27-29页 |
| 2.2.1 菌种 | 第27页 |
| 2.2.2 试剂和工具酶 | 第27页 |
| 2.2.3 质粒 | 第27-28页 |
| 2.2.4 培养基和溶液 | 第28页 |
| 2.2.5 主要仪器 | 第28-29页 |
| 2.3 方法 | 第29-38页 |
| 2.3.1 掷孢酵母总RNA的提取及cDNA的合成 | 第29-30页 |
| 2.3.2 定点突变crtYB基因 | 第30-32页 |
| 2.3.3 突变基因crtYBD322W的扩增 | 第32-34页 |
| 2.3.4 重组质粒pMD18-T-crtYBD322W的构建 | 第34页 |
| 2.3.5 大肠杆菌DH5α感受态细胞的制备 | 第34-35页 |
| 2.3.6 重组质粒pMD18-T-crtYBD322W对大肠杆菌DH5α的转化 | 第35页 |
| 2.3.7 阳性克隆筛选 | 第35-36页 |
| 2.3.8 质粒pMD18-T-crtYBD322W的提取 | 第36-37页 |
| 2.3.9 目的基因在大肠杆菌DH5α中的表达 | 第37-38页 |
| 2.3.10 突变基因crtYBD322W的功能验证 | 第38页 |
| 2.3.11 转化菌株类胡萝卜素的提取与检测 | 第38页 |
| 2.3.12 突变基因crtYBD322W的生物信息学分析 | 第38页 |
| 2.4 结果与分析 | 第38-49页 |
| 2.4.1 突变基因crtYBD322W的生物信息学分析 | 第38-41页 |
| 2.4.2 突变基因片段的获得 | 第41-42页 |
| 2.4.3 重组质粒的筛选和鉴定 | 第42-43页 |
| 2.4.4 序列分析 | 第43-44页 |
| 2.4.5 表达载体的构建 | 第44-45页 |
| 2.4.6 突变基因crtYBD322W的功能验证 | 第45-48页 |
| 2.4.7 Cr tYB蛋白三维结构模型的构建 | 第48-49页 |
| 2.5 结论与讨论 | 第49-51页 |
| 第三章 掷孢酵母NGR和Y9中基因crtYB、crtI与crtE的差异表达分析 | 第51-62页 |
| 3.1 引言 | 第51页 |
| 3.2 材料 | 第51-52页 |
| 3.2.1 菌种 | 第51页 |
| 3.2.2 试剂 | 第51页 |
| 3.2.3 试验仪器 | 第51-52页 |
| 3.2.4 引物 | 第52页 |
| 3.3 方法 | 第52-54页 |
| 3.3.1 掷孢酵母野生型NGR与黄化突变株Y9的培养与收集 | 第52页 |
| 3.3.2 掷孢酵母NGR与Y9类胡萝卜素的提取 | 第52页 |
| 3.3.3 绘制β-胡萝卜素标准曲线 | 第52-53页 |
| 3.3.4 类胡萝卜素的组分与含量分析 | 第53页 |
| 3.3.5 掷孢酵母野生型NGR与黄化突变株Y9总RNA的提取 | 第53页 |
| 3.3.6 NGR与Y9 cDNA的合成 | 第53页 |
| 3.3.7 掷孢酵母野生型NGR与黄化突变株Y9 crtYB、crtI与crtE基因转录水平检测 | 第53-54页 |
| 3.4 结果与分析 | 第54-61页 |
| 3.4.1 β-胡萝卜素标准曲线 | 第54页 |
| 3.4.2 NGR与Y9中β-胡萝卜素含量分析 | 第54-56页 |
| 3.4.3 NGR与Y9中基因crtYB、crtI与crtE转录组数据差异表达分析 | 第56-57页 |
| 3.4.4 实时荧光定量PCR内参基因和目的基因参数分析 | 第57-60页 |
| 3.4.5 NGR与Y9中基因crtYB、crtI与crtE差异表达分析 | 第60-61页 |
| 3.5 结论与讨论 | 第61-62页 |
| 第四章 结论与展望 | 第62-64页 |
| 4.1 结论 | 第62页 |
| 4.1.1 掷孢酵母类胡萝卜素合成关键酶CrtYB功能位点分析 | 第62页 |
| 4.1.2 掷孢酵母野生型NGR与黄化突变株Y9类胡萝卜素合成关键酶基因的差异表达分析 | 第62页 |
| 4.2 展望 | 第62-64页 |
| 参考文献 | 第64-70页 |
| 附录 | 第70-73页 |
| 致谢 | 第73-74页 |
| 攻读硕士学位期间发表文章 | 第74页 |
