| 摘要 | 第2-3页 |
| Abstract | 第3页 |
| 引言 | 第7-9页 |
| 第一章 松材线虫sodh-1 基因的克隆与序列分析 | 第9-17页 |
| 1.1 材料与方法 | 第9-14页 |
| 1.1.1 试验材料 | 第9-10页 |
| 1.1.1.1 松材线虫及其cDNA文库的构建 | 第9页 |
| 1.1.1.2 克隆菌株与载体 | 第9页 |
| 1.1.1.3 试剂 | 第9页 |
| 1.1.1.4 主要仪器设备 | 第9-10页 |
| 1.1.1.5 主要溶液和培养基及其配制 | 第10页 |
| 1.1.2 主要实验方法 | 第10-14页 |
| 1.1.2.1 松材线虫sodh-1 基因扩增 | 第10-11页 |
| 1.1.2.2 PCR产物回收 | 第11-12页 |
| 1.1.2.3 pCloneEZ-TA-sodh-1 载体的构建 | 第12页 |
| 1.1.2.4 大肠杆菌DH5α感受态细胞的制备和质粒的转化 | 第12-13页 |
| 1.1.2.5 重组质粒的提取 | 第13页 |
| 1.1.2.6 重组质粒双酶切鉴定 | 第13-14页 |
| 1.1.2.7 PCR产物的序列分析 | 第14页 |
| 1.2 结果与分析 | 第14-16页 |
| 1.2.1 松材线虫山梨醇脱氢酶基因sodh-1 的扩增 | 第14-15页 |
| 1.2.2 重组质粒的双酶切鉴定 | 第15页 |
| 1.2.3 序列分析 | 第15-16页 |
| 本章小结 | 第16-17页 |
| 第二章 重组SODH-1 的表达纯化与性质研究 | 第17-29页 |
| 2.1 材料与方法 | 第17-23页 |
| 2.1.1 试验材料 | 第17-19页 |
| 2.1.1.1 菌株与载体 | 第17页 |
| 2.1.1.2 试剂 | 第17-18页 |
| 2.1.1.3 主要仪器设备 | 第18页 |
| 2.1.1.4 主要溶液和培养基及其配制 | 第18-19页 |
| 2.1.2 实验方法 | 第19-23页 |
| 2.1.2.1 重组表达载体pET-15b-sodh-1 的构建 | 第19-20页 |
| 2.1.2.2 表达重组山梨醇脱氢酶工程菌的构建 | 第20页 |
| 2.1.2.3 松材线虫山梨醇脱氢酶基因sodh-1 在工程菌中的诱导表达 | 第20-21页 |
| 2.1.2.4 包涵体的分离与洗涤 | 第21页 |
| 2.1.2.5 亲和层析纯化重组蛋白 | 第21-22页 |
| 2.1.2.6 松材线虫山梨醇脱氢酶比活力的测定 | 第22页 |
| 2.1.2.7 不同温度对松材线虫山梨醇脱氢酶活力的影响 | 第22页 |
| 2.1.2.8 不同pH值对松材线虫山梨醇脱氢酶活力的影响 | 第22-23页 |
| 2.2 结果与分析 | 第23-28页 |
| 2.2.1 重组表达载体的双酶切鉴定与工程菌的菌落PCR鉴定 | 第23-24页 |
| 2.2.2 松材线虫山梨醇脱氢酶sodh-1 基因在大肠杆菌中的诱导表达 | 第24页 |
| 2.2.3 包涵体的分离 | 第24-25页 |
| 2.2.4 亲和层析纯化重组蛋白 | 第25-26页 |
| 2.2.5 松材线虫山梨醇脱氢酶比活力的测定 | 第26-27页 |
| 2.2.6 不同温度对松材线虫山梨醇脱氢酶活力的影响 | 第27页 |
| 2.2.7 不同pH值对松材线虫山梨醇脱氢酶活力的影响 | 第27-28页 |
| 本章小结 | 第28-29页 |
| 第三章 P.fluorescens GcM5-1A与乙醇对松材线虫sodh-1 基因表达水平的影响 | 第29-36页 |
| 3.1 材料与方法 | 第29-32页 |
| 3.1.1 实验材料 | 第29-30页 |
| 3.1.1.1 无菌松材线虫和携带P. fluorescens GcM5-1A松材线虫及供试菌株 | 第29页 |
| 3.1.1.2 主要试剂 | 第29页 |
| 3.1.1.4 主要仪器设备 | 第29-30页 |
| 3.1.2 主要试验方法 | 第30-32页 |
| 3.1.2.1 松材线虫总 RNA 的提取及质量检测 | 第30页 |
| 3.1.2.2 松材线虫山梨醇脱氢酶基因sodh-1 cDNA第一链的合成 | 第30-31页 |
| 3.1.2.3 P.fluorescens GcM5-1A对松材线虫sodh-1 基因表达水平的影响 | 第31-32页 |
| 3.1.2.4 不同浓度乙醇对松材线虫山梨醇脱氢酶基因表达水平的影响 | 第32页 |
| 3.2 结果与分析 | 第32-35页 |
| 3.2.1 松材线虫总RNA的提取 | 第32-33页 |
| 3.2.2 P. fluorescens GcM5-1A对松材线虫sodh-1 基因表达水平的影响 | 第33页 |
| 3.2.3 实验组与对照组松材线虫总RNA的提取和质量检测 | 第33-34页 |
| 3.2.4 不同浓度乙醇对松材线虫山梨醇脱氢酶基因sodh-1 表达水平的影响 | 第34-35页 |
| 本章小结 | 第35-36页 |
| 全文讨论与结论 | 第36-38页 |
| 参考文献 | 第38-42页 |
| 综述 | 第42-54页 |
| 1.松材线虫病概述 | 第42页 |
| 2.松材线虫病的症状及其防治 | 第42-43页 |
| 3.松材线虫病的病原 | 第43页 |
| 4.近段时间松材线虫病致病机理假说 | 第43-44页 |
| 4.1 酶假说 | 第43-44页 |
| 4.2 空洞化假说 | 第44页 |
| 4.3 毒素假说 | 第44页 |
| 5 关于松材线虫基因研究进展 | 第44-47页 |
| 5.1 与松材线虫致病机理相关基因的研究 | 第44-46页 |
| 5.2 与松材线虫生长发育相关基因的研究 | 第46-47页 |
| 6.松材线虫携带菌对松材线虫基因表达的影响 | 第47-48页 |
| 展望 | 第48-49页 |
| 参考文献 | 第49-54页 |
| 攻读学位期间的研究成果 | 第54-55页 |
| 致谢 | 第55-56页 |
