| 摘要 | 第10-12页 |
| ABSTRACT | 第12-13页 |
| 第一章 文献综述 | 第16-35页 |
| 1 核盘菌和菌核病的研究进展 | 第16-19页 |
| 1.1 核盘菌的危害及致病机理 | 第16-17页 |
| 1.1.1 核盘菌的危害 | 第16页 |
| 1.1.2 核盘菌的致病机理 | 第16-17页 |
| 1.2 菌核病的防治 | 第17-19页 |
| 1.2.1 抗病品种选育 | 第17-18页 |
| 1.2.2 农业防治 | 第18页 |
| 1.2.3 化学防治 | 第18-19页 |
| 1.2.4 生物防治 | 第19页 |
| 2 真菌病毒的研究进展 | 第19-34页 |
| 2.1 真菌病毒的分类 | 第20-25页 |
| 2.2 真菌病毒与病原真菌的互作 | 第25-29页 |
| 2.2.1 重要的病原真菌-真菌病毒互作系统 | 第25-28页 |
| 2.2.1.1 Cryphonectria parasitica - CHV1/EP713互作系统 | 第25页 |
| 2.2.1.2 Helminthosporium victoriae-Hv V190S互作系统 | 第25-26页 |
| 2.2.1.3 Rosellinia necatrix-My RV3互作系统 | 第26页 |
| 2.2.1.4 Sclerotinia sclerotiorum-Ss DRV和Sclerotinia sclerotiorum-Ss HDV-1 互作系统 | 第26-27页 |
| 2.2.1.5 Botrytis cinerea-BVF互作系统 | 第27页 |
| 2.2.1.6 Fusarium graminearum -Fg V1互作系统 | 第27-28页 |
| 2.2.2 基因沉默的病毒抑制子 | 第28-29页 |
| 2.3 卫星RNA病毒 | 第29-30页 |
| 2.4 真菌病毒的传播 | 第30-31页 |
| 2.5 真菌病毒与病毒进化 | 第31-32页 |
| 2.6 高通量转录组测序在中生物学领域的应用 | 第32-33页 |
| 2.7 真菌病毒与生物防治 | 第33-34页 |
| 3 本研究目的与意义 | 第34-35页 |
| 第二章 核盘菌低毒菌株SX466的生物学特性及SSMBV1的相关研究 | 第35-78页 |
| 1 材料与方法 | 第35-52页 |
| 1.1 试验材料 | 第35-40页 |
| 1.1.1 供试菌株 | 第35页 |
| 1.1.2 供试植物 | 第35页 |
| 1.1.3 主要试剂、酶及试剂盒 | 第35-37页 |
| 1.1.4 培养基 | 第37-38页 |
| 1.1.5 主要载体及引物 | 第38-40页 |
| 1.1.6 主要仪器和设备 | 第40页 |
| 1.2 试验方法 | 第40-52页 |
| 1.2.1 菌株的分离、活化与培养 | 第40-41页 |
| 1.2.2 菌落形态观察 | 第41页 |
| 1.2.3 生长速度测定 | 第41页 |
| 1.2.4 致病力测定 | 第41页 |
| 1.2.5 菌丝中ds RNA的提取及纯化 | 第41-42页 |
| 1.2.6 总RNA提取 | 第42页 |
| 1.2.7 RT-PCR | 第42-43页 |
| 1.2.8 全长序列的克隆及序列拼接 | 第43-46页 |
| 1.2.8.1 Ss MBV1的随机引物克隆 | 第43-44页 |
| 1.2.8.2 Ss MBV1的特异性克隆 | 第44-45页 |
| 1.2.8.3 Ss MBV1的末端序列克隆 | 第45-46页 |
| 1.2.8.4 序列拼接与分析 | 第46页 |
| 1.2.9 Ss MBV1水平传播能力的测定 | 第46页 |
| 1.2.10原生质体制备 | 第46-47页 |
| 1.2.11病毒粒体的提纯 | 第47-49页 |
| 1.2.11.1 用蔗糖密度梯度法提取病毒粒体 | 第47-48页 |
| 1.2.11.2 用氯化铯密度梯度法提取病毒粒体 | 第48-49页 |
| 1.2.12病毒粒体的负染透射电镜观察（TEM） | 第49页 |
| 1.2.13病毒粒子的核酸的裂解检测 | 第49页 |
| 1.2.14病毒粒体结构蛋白的检测 | 第49-50页 |
| 1.2.15病毒粒子结构蛋白的指纹图谱分析（PMF） | 第50页 |
| 1.2.16 PEG介导病毒粒子转染核盘菌原生质体 | 第50-51页 |
| 1.2.17 Northern杂交 | 第51-52页 |
| 1.2.17.1 电泳、转膜及固定 | 第51页 |
| 1.2.17.2 预杂交 | 第51页 |
| 1.2.17.3 地高辛标记DNA探针 | 第51-52页 |
| 1.2.17.4 杂交 | 第52页 |
| 1.2.17.5 洗膜及显色 | 第52页 |
| 2 结果与分析 | 第52-73页 |
| 2.1 核盘菌低毒菌株SX466的生物学性状 | 第52-54页 |
| 2.1.1 核盘菌低毒菌株SX466菌落形态异常和生长速度缓慢 | 第52-53页 |
| 2.1.2 菌株SX466具有弱致病性 | 第53-54页 |
| 2.2 SX466中的真菌病毒研究 | 第54-69页 |
| 2.2.1 SX466携带真菌病毒且形成病毒粒体 | 第54-56页 |
| 2.2.2 真菌病毒Ss MBV1的克隆和基因组结构分析 | 第56-61页 |
| 2.2.3 Ss MBV1系统发育树 | 第61-65页 |
| 2.2.4 L2-ds RNA/Ss MBV1中蛋白酶 3D结构预测 | 第65-66页 |
| 2.2.5 L2-ds RNA的蛋白酶结构域系统进化分析 | 第66-69页 |
| 2.3 菌株SX466中真菌病毒水平传播能力研究 | 第69-70页 |
| 2.3.1 菌株SX466中真菌病毒可水平传播 | 第69-70页 |
| 2.3.2 水平传播衍生菌株电镜观察和核酸裂解 | 第70页 |
| 2.4 SSMBV1病毒粒体转染核盘菌原生质体研究 | 第70-72页 |
| 2.4.1 病毒粒体直接侵染核盘菌原生质体 | 第70页 |
| 2.4.2 转染子中含有球形病毒粒体及ds RNA | 第70-71页 |
| 2.4.3 病毒粒体的结构蛋白主要由ORF1编码 | 第71-72页 |
| 2.5 SSMBV1序列具有特异性 | 第72-73页 |
| 3 结论与讨论 | 第73-78页 |
| 3.1 携带DSRNA的SX466表现低毒特性 | 第73-74页 |
| 3.2 SSMBV1基因组解析及其分类地位界定 | 第74-75页 |
| 3.3 L2-DSRNA可能是L1-DSRNA的卫星RNA | 第75-76页 |
| 3.4 水平基因转移 | 第76页 |
| 3.5 真菌病毒在不同菌株间水平传播 | 第76-78页 |
| 第三章 核盘菌低毒菌株SX466中L2-DSRNA/SSMBV1的功能分析 | 第78-107页 |
| 1 材料与方法 | 第78-91页 |
| 1.1 试验材料 | 第78-82页 |
| 1.1.1 供试菌株 | 第78页 |
| 1.1.2 供试植物 | 第78页 |
| 1.1.3 主要试剂、酶及试剂盒 | 第78-80页 |
| 1.1.4 培养基 | 第80页 |
| 1.1.5 主要载体及引物 | 第80-82页 |
| 1.1.6 主要仪器和设备 | 第82页 |
| 1.2 试验方法 | 第82-91页 |
| 1.2.1 菌株的活化与培养 | 第82页 |
| 1.2.2 菌株的生物学性状测定 | 第82-83页 |
| 1.2.3 RT-PCR和Real-Time PCR | 第83页 |
| 1.2.4 质粒的提取 | 第83页 |
| 1.2.5 病毒基因沉默 | 第83-89页 |
| 1.2.5.1 沉默载体构建 | 第83-87页 |
| 1.2.5.2 农杆菌电击转化 | 第87页 |
| 1.2.5.3 ATMT介导的真菌转化 | 第87-88页 |
| 1.2.5.4 转化子的验证 | 第88-89页 |
| 1.2.6 高通量转录组测序（RNA-Seq ） | 第89-91页 |
| 2 结果与分析 | 第91-104页 |
| 2.1 DSRNA可以进行水平传播 | 第91-93页 |
| 2.2 PEG介导病毒粒子转染核盘菌原生质体 | 第93-95页 |
| 2.2.1 转染子生物学特性 | 第93-94页 |
| 2.2.2 L2-ds RNA对L1-ds RNA累积量的影响 | 第94-95页 |
| 2.3 病毒基因沉默对寄主核盘菌的影响 | 第95-98页 |
| 2.4 转录组测序分析 | 第98-104页 |
| 2.4.1 转录组数据q PCR验证 | 第98-102页 |
| 2.4.2 差异基因的GO功能显著性富集分析 | 第102-103页 |
| 2.4.3 差异基因的KEGG显著性富集分析 | 第103-104页 |
| 3 结论与讨论 | 第104-107页 |
| 3.1 L2-DSRNA的作用 | 第104-105页 |
| 3.2 被真菌病毒感染前后的核盘菌中存在多个差异表达基因 | 第105-106页 |
| 3.3 基因沉默对核盘菌的影响 | 第106-107页 |
| 第四章 低毒菌株SX466中其它真菌病毒研究 | 第107-114页 |
| 1 材料与方法 | 第107-110页 |
| 1.1 试验材料 | 第107-109页 |
| 1.1.1 供试菌株 | 第107页 |
| 1.1.2 主要试剂、酶及试剂盒 | 第107-108页 |
| 1.1.3 培养基 | 第108页 |
| 1.1.4 主要载体及引物 | 第108-109页 |
| 1.1.5 主要仪器和设备 | 第109页 |
| 1.2 试验方法 | 第109-110页 |
| 1.2.1 菌株的活化与培养 | 第109页 |
| 1.2.2 真菌病毒克隆 | 第109-110页 |
| 2 结果与分析 | 第110-112页 |
| 2.1 SX466中其它真菌病毒研究 | 第110-112页 |
| 2.1.1 M-ds RNA和S-ds RNA基因组的克隆 | 第110页 |
| 2.1.2 Ss MV2/SX466和Ss PV/SX466系统发育树构建 | 第110-112页 |
| 2.2 菌株SX466中M-DSRNA和S-DSRNA水平传播能力测定 | 第112页 |
| 3 结论与讨论 | 第112-114页 |
| 第五章 结论与展望 | 第114-117页 |
| 1 结论 | 第114-116页 |
| 1.1 SX466的生物学特性和SSMBV1的基因组分析 | 第114页 |
| 1.1.1 SX466的生物学特性 | 第114页 |
| 1.1.2 Ss MBV1的基因组分析 | 第114页 |
| 1.2 SSMBV1水平传播和体外传播 | 第114-115页 |
| 1.2.1 Ss MBV1水平传播 | 第114页 |
| 1.2.2 Ss MBV1体外传播 | 第114-115页 |
| 1.3 L2-DSRNA/SSMBV1的功能研究 | 第115页 |
| 1.4 SX466中M-DSRNA和S-DSRNA研究 | 第115-116页 |
| 2 展望 | 第116-117页 |
| 参考文献 | 第117-141页 |
| 附录 1：结构蛋白指纹图谱分析 | 第141-147页 |
| 附录 2: SX466菌种中M-DSRNA和S-DSRNA部分基因组序列 | 第147-151页 |
| 致谢 | 第151-153页 |
