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立氏立克次体主要表面蛋白鉴定及其免疫保护性研究

缩略词表第7-9页
摘要第9-12页
Abstract第12-15页
前言第16-25页
    1、立氏立克次体的主要生物学特性第16-19页
    2、立氏立克次体的致病机制第19-22页
    3、落基山斑点热疫苗研究现状第22-24页
    4、本课题的研究目的及意义第24-25页
第一部分 立氏立克次体表面蛋白的分离与鉴定第25-53页
    引言第25页
    1 材料第25-30页
        1.1 实验动物、菌株及鸡胚第25-26页
        1.2 主要试剂第26页
        1.3 实验仪器第26页
        1.4 主要试剂的配制第26-30页
    2 方法第30-40页
        2.1 复苏立氏立克次体毒株并感染Vero细胞第30页
        2.2 Gimenez染色法和间接免疫荧光法(IFA)观察立克次体第30-31页
        2.3 空斑法获取立氏立克次体单克隆菌株第31-32页
        2.4 立氏立克次体单克隆株的鉴定第32-33页
        2.5 立氏立克次体单克隆株的大量培养及纯化第33-34页
        2.6 生物素亲和层析分离立氏立克次体表面蛋白第34-35页
        2.7 双向电泳和质谱分析第35-37页
        2.8 生物信息学分析各外膜蛋白的结构及功能第37页
        2.9 表面蛋白在立氏立克次体的定位第37-40页
    3 结果第40-51页
        3.1 立氏立克次体复苏第40-41页
        3.2 立氏立克次体克隆与鉴定第41-42页
        3.3 立克次体的培养及泛影葡胺不连续密度梯度离心纯化第42-44页
        3.4 双向电泳及质谱鉴定立氏立克次体表面蛋白第44页
        3.5 生物信息学分析第44-49页
        3.6 立氏立克次体表面蛋白的亚细胞定位第49-51页
    4 讨论第51-53页
第二部分立氏立克次体表面蛋白免疫保护性及其机制研究第53-82页
    引言第53页
    1 材料第53-58页
        1.1 实验动物、菌株、细胞、质粒第53-54页
        1.2 主要试剂第54页
        1.3 实验仪器第54-55页
        1.4 主要试剂的配制第55-58页
    2 方法第58-68页
        2.1 重组质粒的构建第58页
        2.2 重组蛋白的表达第58-61页
        2.3 立氏立克次体重组蛋白抗原的免疫印迹分析第61-62页
        2.4 血清中和试验第62页
        2.5 动物保护性试验一:五种新发现细胞表面蛋白免疫保护性评价第62-63页
        2.6 动物保护性试验二:重组蛋白Adr2和Ybg F免疫保护性评价第63-65页
        2.7 T细胞增殖及相关细胞因子检测第65-66页
        2.8 间接免疫荧光和透射免疫电镜研究Ybg F蛋白亚细胞定位第66-67页
        2.9 统计学分析第67-68页
    3 结果第68-80页
        3.1 立氏立克次体重组蛋白的免疫印迹第68页
        3.2 Ybg F蛋白在立氏立克次体表面的亚细胞定位第68-69页
        3.3 血清中和实验第69-70页
        3.4 免疫保护性评价第70-73页
        3.5 组织病理学分析第73-75页
        3.6 体液免疫第75-77页
        3.7 细胞免疫第77-80页
    4 讨论第80-82页
第三部分立氏立克次体保护性抗原免疫保护效力的增强研究第82-102页
    引言第82-83页
    1 材料第83页
        1.1 实验动物、菌株、细胞、质粒第83页
        1.2 主要试剂、仪器第83页
    2 方法第83-87页
        2.1 蛋白表达及纯化第83页
        2.2 小鼠免疫及攻毒第83-84页
        2.3 病理学切片的制备第84页
        2.4 特异性抗体的检测第84-85页
        2.5 IFA第85页
        2.6 血清中和试验第85页
        2.7 体外细胞因子检测第85-86页
        2.8 血清中细胞因子检测第86页
        2.9 统计学分析第86-87页
    3 结果第87-99页
        3.1 五个Omp B重组蛋白的免疫保护性评价第87-88页
        3.2 r Adr2与r Omp B-4 联合免疫的保护效能评价第88-89页
        3.3 r Adr2与r Omp B-4 联合免疫小鼠的组织病理学分析第89-91页
        3.4 r Omp B-4 与CMR-C联合免疫的抗立氏立克次体保护效能评价第91页
        3.5 r Omp B-4 与CMR-C联合免疫的抗贝氏柯克斯体保护效能评价第91页
        3.6 r Omp B-4 与CMR-C联合免疫小鼠的组织病理学分析第91-92页
        3.7 血清中和试验第92-94页
        3.8 体液免疫反应第94-96页
        3.9 细胞免疫反应第96-99页
    4 讨论第99-102页
结论第102-103页
参考文献第103-111页
附录第111-122页
综述第122-127页
个人简历第127-129页
致谢第129-131页

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