缩略词表 | 第7-9页 |
摘要 | 第9-12页 |
Abstract | 第12-15页 |
前言 | 第16-25页 |
1、立氏立克次体的主要生物学特性 | 第16-19页 |
2、立氏立克次体的致病机制 | 第19-22页 |
3、落基山斑点热疫苗研究现状 | 第22-24页 |
4、本课题的研究目的及意义 | 第24-25页 |
第一部分 立氏立克次体表面蛋白的分离与鉴定 | 第25-53页 |
引言 | 第25页 |
1 材料 | 第25-30页 |
1.1 实验动物、菌株及鸡胚 | 第25-26页 |
1.2 主要试剂 | 第26页 |
1.3 实验仪器 | 第26页 |
1.4 主要试剂的配制 | 第26-30页 |
2 方法 | 第30-40页 |
2.1 复苏立氏立克次体毒株并感染Vero细胞 | 第30页 |
2.2 Gimenez染色法和间接免疫荧光法(IFA)观察立克次体 | 第30-31页 |
2.3 空斑法获取立氏立克次体单克隆菌株 | 第31-32页 |
2.4 立氏立克次体单克隆株的鉴定 | 第32-33页 |
2.5 立氏立克次体单克隆株的大量培养及纯化 | 第33-34页 |
2.6 生物素亲和层析分离立氏立克次体表面蛋白 | 第34-35页 |
2.7 双向电泳和质谱分析 | 第35-37页 |
2.8 生物信息学分析各外膜蛋白的结构及功能 | 第37页 |
2.9 表面蛋白在立氏立克次体的定位 | 第37-40页 |
3 结果 | 第40-51页 |
3.1 立氏立克次体复苏 | 第40-41页 |
3.2 立氏立克次体克隆与鉴定 | 第41-42页 |
3.3 立克次体的培养及泛影葡胺不连续密度梯度离心纯化 | 第42-44页 |
3.4 双向电泳及质谱鉴定立氏立克次体表面蛋白 | 第44页 |
3.5 生物信息学分析 | 第44-49页 |
3.6 立氏立克次体表面蛋白的亚细胞定位 | 第49-51页 |
4 讨论 | 第51-53页 |
第二部分立氏立克次体表面蛋白免疫保护性及其机制研究 | 第53-82页 |
引言 | 第53页 |
1 材料 | 第53-58页 |
1.1 实验动物、菌株、细胞、质粒 | 第53-54页 |
1.2 主要试剂 | 第54页 |
1.3 实验仪器 | 第54-55页 |
1.4 主要试剂的配制 | 第55-58页 |
2 方法 | 第58-68页 |
2.1 重组质粒的构建 | 第58页 |
2.2 重组蛋白的表达 | 第58-61页 |
2.3 立氏立克次体重组蛋白抗原的免疫印迹分析 | 第61-62页 |
2.4 血清中和试验 | 第62页 |
2.5 动物保护性试验一:五种新发现细胞表面蛋白免疫保护性评价 | 第62-63页 |
2.6 动物保护性试验二:重组蛋白Adr2和Ybg F免疫保护性评价 | 第63-65页 |
2.7 T细胞增殖及相关细胞因子检测 | 第65-66页 |
2.8 间接免疫荧光和透射免疫电镜研究Ybg F蛋白亚细胞定位 | 第66-67页 |
2.9 统计学分析 | 第67-68页 |
3 结果 | 第68-80页 |
3.1 立氏立克次体重组蛋白的免疫印迹 | 第68页 |
3.2 Ybg F蛋白在立氏立克次体表面的亚细胞定位 | 第68-69页 |
3.3 血清中和实验 | 第69-70页 |
3.4 免疫保护性评价 | 第70-73页 |
3.5 组织病理学分析 | 第73-75页 |
3.6 体液免疫 | 第75-77页 |
3.7 细胞免疫 | 第77-80页 |
4 讨论 | 第80-82页 |
第三部分立氏立克次体保护性抗原免疫保护效力的增强研究 | 第82-102页 |
引言 | 第82-83页 |
1 材料 | 第83页 |
1.1 实验动物、菌株、细胞、质粒 | 第83页 |
1.2 主要试剂、仪器 | 第83页 |
2 方法 | 第83-87页 |
2.1 蛋白表达及纯化 | 第83页 |
2.2 小鼠免疫及攻毒 | 第83-84页 |
2.3 病理学切片的制备 | 第84页 |
2.4 特异性抗体的检测 | 第84-85页 |
2.5 IFA | 第85页 |
2.6 血清中和试验 | 第85页 |
2.7 体外细胞因子检测 | 第85-86页 |
2.8 血清中细胞因子检测 | 第86页 |
2.9 统计学分析 | 第86-87页 |
3 结果 | 第87-99页 |
3.1 五个Omp B重组蛋白的免疫保护性评价 | 第87-88页 |
3.2 r Adr2与r Omp B-4 联合免疫的保护效能评价 | 第88-89页 |
3.3 r Adr2与r Omp B-4 联合免疫小鼠的组织病理学分析 | 第89-91页 |
3.4 r Omp B-4 与CMR-C联合免疫的抗立氏立克次体保护效能评价 | 第91页 |
3.5 r Omp B-4 与CMR-C联合免疫的抗贝氏柯克斯体保护效能评价 | 第91页 |
3.6 r Omp B-4 与CMR-C联合免疫小鼠的组织病理学分析 | 第91-92页 |
3.7 血清中和试验 | 第92-94页 |
3.8 体液免疫反应 | 第94-96页 |
3.9 细胞免疫反应 | 第96-99页 |
4 讨论 | 第99-102页 |
结论 | 第102-103页 |
参考文献 | 第103-111页 |
附录 | 第111-122页 |
综述 | 第122-127页 |
个人简历 | 第127-129页 |
致谢 | 第129-131页 |