| 摘要 | 第8-10页 |
| 英文摘要 | 第10-11页 |
| 1 前言 | 第12-17页 |
| 1.1 CRISPR/Cas9技术的研究进展 | 第12-15页 |
| 1.1.1 CRISPR/Cas9技术的出现及发展 | 第12页 |
| 1.1.2 CRISPR/Cas系统的结构 | 第12-13页 |
| 1.1.3 Ⅱ型CRISPR/Cas系统的作用机制 | 第13页 |
| 1.1.4 CRISPR/Cas9技术设计靶位点的注意事项 | 第13-14页 |
| 1.1.5 CRISPR/Cas9技术的应用 | 第14-15页 |
| 1.2 MSTN基因的研究进展 | 第15-16页 |
| 1.2.1 MSTN基因的结构和功能 | 第15页 |
| 1.2.2 MSTN基因的研究概况 | 第15-16页 |
| 1.3 研究目的与意义 | 第16-17页 |
| 2 材料与方法 | 第17-27页 |
| 2.1 实验材料 | 第17-19页 |
| 2.1.1 菌株、质粒与细胞 | 第17页 |
| 2.1.2 工具酶、试剂盒和其他试剂 | 第17页 |
| 2.1.3 主要仪器 | 第17-18页 |
| 2.1.4 分析软件 | 第18页 |
| 2.1.5 主要试剂的配制 | 第18-19页 |
| 2.2 实验方法 | 第19-27页 |
| 2.2.1 CRISPR/Cas9打靶载体的构建 | 第19-22页 |
| 2.2.2 细胞的冻存与复苏 | 第22页 |
| 2.2.3 牛胎儿成纤维细胞的传代培养 | 第22-23页 |
| 2.2.4 牛胎儿成纤维细胞的转染及突变效率的检测 | 第23-24页 |
| 2.2.5 有限稀释法制备单克隆细胞及突变细胞株的筛选 | 第24-25页 |
| 2.2.6 双靶点法对突变效率的影响 | 第25-27页 |
| 3 结果与分析 | 第27-34页 |
| 3.1 CRISPR/Cas9打靶载体的构建 | 第27-28页 |
| 3.1.1 psPgRNA、pX330质粒的单酶切结果 | 第27页 |
| 3.1.2 靶位点连接载体测序结果 | 第27-28页 |
| 3.2 转染细胞突变效率的检测 | 第28-30页 |
| 3.3 细胞克隆的制备和MSTN突变细胞株的筛选 | 第30-31页 |
| 3.4 双靶点法的突变效率 | 第31-34页 |
| 3.4.1 双靶点载体靶位点的测序结果 | 第31-32页 |
| 3.4.2 双靶点法突变效率的检测 | 第32-34页 |
| 4 讨论 | 第34-36页 |
| 4.1 CRISPR/Cas9技术的选择 | 第34页 |
| 4.2 MSTN基因靶位点的选择 | 第34-35页 |
| 4.3 转染方法的选择 | 第35页 |
| 4.4 细胞单克隆培养的注意事项 | 第35-36页 |
| 5 结论 | 第36-37页 |
| 致谢 | 第37-38页 |
| 参考文献 | 第38-42页 |
| 攻读硕士学位期间发表的学术论文 | 第42页 |
