| 致谢 | 第5-6页 |
| 摘要 | 第6-8页 |
| Abstract | 第8-9页 |
| 缩略词表 | 第10-14页 |
| 前言 | 第14-16页 |
| 1 材料 | 第16-21页 |
| 1.1 组织样本和细胞系 | 第16-18页 |
| 1.2 试剂 | 第18-20页 |
| 1.2.1 试剂与药品 | 第18页 |
| 1.2.2 主要溶液与试剂的配制 | 第18-20页 |
| 1.3 仪器 | 第20-21页 |
| 2 方法 | 第21-31页 |
| 2.1 细胞培养和耐阿霉素细胞系的建立 | 第21页 |
| 2.2 LipofectamineRNAi MAX转染siRNA | 第21-22页 |
| 2.3 pcDNA-TUG1过表达载体的构建和鉴定 | 第22-26页 |
| 2.3.1 PCR扩增编码TUG1的DNA序列 | 第22-23页 |
| 2.3.2 PCR产物回收 | 第23页 |
| 2.3.3 纯化的PCR产物及质粒进行酶切 | 第23-24页 |
| 2.3.4 酶切后质粒与小片段的连接 | 第24页 |
| 2.3.5 重组质粒的转化 | 第24-25页 |
| 2.3.6 重组质粒的鉴定 | 第25-26页 |
| 2.4 qRT-PCR检测基因表达 | 第26-28页 |
| 2.4.1 细胞/组织总RNA的提取 | 第26-27页 |
| 2.4.2 mRNA反转成cDNA | 第27页 |
| 2.4.3 qRT-PCR检测 | 第27-28页 |
| 2.5 Western blotting检测蛋白表达 | 第28-30页 |
| 2.5.1 蛋白样品的制备 | 第28页 |
| 2.5.2 聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE) | 第28-29页 |
| 2.5.3 转膜 | 第29-30页 |
| 2.5.4 免疫反应 | 第30页 |
| 2.6 CCK-8试剂盒检测细胞活性 | 第30页 |
| 2.7 流式细胞仪检测细胞凋亡 | 第30-31页 |
| 3 结果 | 第31-40页 |
| 3.1 TUG1基因在肝细胞癌组织及癌旁正常组织中的表达鉴定 | 第31页 |
| 3.2 TUG1基因在阿霉素耐药型肝癌细胞系中的表达鉴定 | 第31-32页 |
| 3.3 转染si-TUG1的阿霉素耐药性肝癌细胞系的构建 | 第32-33页 |
| 3.4 低表达TUG1基因逆转肝癌细胞系的阿霉素耐药性 | 第33-35页 |
| 3.5 转染pcDNA-TUG1的肝癌细胞系的构建 | 第35-36页 |
| 3.6 过表达TUG1基因促进细胞凋亡 | 第36-38页 |
| 3.7 TUG1基因调节P-gp和MDR1的表达 | 第38-40页 |
| 4 讨论 | 第40-44页 |
| 5 结论 | 第44-45页 |
| 参考文献 | 第45-50页 |
| 综述 LncRNA对肝癌多耐药性的调控 | 第50-78页 |
| 参考文献 | 第67-78页 |
| 作者简历及攻读博士学位期间主要的研究成果 | 第78页 |
