| 摘要 | 第10-11页 |
| 英文摘要 | 第11-12页 |
| 1 前言 | 第13-18页 |
| 1.1 几丁质 | 第13-14页 |
| 1.2 β-N-乙酰葡萄糖胺糖苷酶的研究进展 | 第14-15页 |
| 1.2.1 β-N-乙酰葡萄糖胺糖苷酶基因 | 第14页 |
| 1.2.2 β-N-乙酰葡萄糖胺糖苷酶的功能研究 | 第14-15页 |
| 1.3 应用前景 | 第15页 |
| 1.4 甘蓝夜蛾 | 第15-16页 |
| 1.5 RNA干扰 | 第16-17页 |
| 1.6 研究目的与意义 | 第17-18页 |
| 1.6.1 研究目的 | 第17页 |
| 1.6.2 研究意义 | 第17-18页 |
| 2 材料与方法 | 第18-40页 |
| 2.1 试验材料及仪器 | 第18-20页 |
| 2.1.1 供试虫源 | 第18页 |
| 2.1.2 试验仪器设备 | 第18页 |
| 2.1.3 试验所用试剂与酶 | 第18-19页 |
| 2.1.4 质粒与菌株 | 第19-20页 |
| 2.2 试验研究技术路线 | 第20页 |
| 2.3 甘蓝夜蛾NAG基因克隆 | 第20-28页 |
| 2.3.1 RNA的提取 | 第20-21页 |
| 2.3.2 第一链c DNA的合成 | 第21页 |
| 2.3.3 目的基因c DNA序列片段克隆 | 第21-24页 |
| 2.3.4 基因克隆 3'-RACE的试验步骤 | 第24页 |
| 2.3.5 基因克隆 5'-RACE的试验步骤 | 第24-27页 |
| 2.3.6 目的基因全长c DNA序列的获取 | 第27-28页 |
| 2.4 碱基序列分析 | 第28页 |
| 2.4.1 利用Blast软件进行序列相似性检索 | 第28页 |
| 2.4.2 全长c DNA可读框架分析 | 第28页 |
| 2.5 蛋白质的结构和功能分析 | 第28-29页 |
| 2.5.1 蛋白质的序列及结构分析 | 第28页 |
| 2.5.2 氨基酸序列同源性分析 | 第28页 |
| 2.5.3 氨基酸序列之间的多重比对分析及进化分析 | 第28-29页 |
| 2.5.4 蛋白质三维结构预测 | 第29页 |
| 2.6 Mb NAG基因原核表达及蛋白活性检测 | 第29-35页 |
| 2.6.1 Mb NAG基因c DNA序列ORF的PCR扩增 | 第29页 |
| 2.6.2 PCR产物酶切反应 | 第29-30页 |
| 2.6.3 E. coli质粒DNA提取和酶切 | 第30页 |
| 2.6.4 大肠杆菌表达载体构建及诱导表达 | 第30-33页 |
| 2.6.5 蛋白纯化及Western blotting分析 | 第33-34页 |
| 2.6.6 蛋白复性及活性检测 | 第34-35页 |
| 2.7 β-N-乙酰葡萄糖胺糖苷酶在不同龄期和不同组织部位表达量 | 第35-36页 |
| 2.8 蜕皮激素诱导Mb NAG基因表达的变化 | 第36页 |
| 2.9 RNAi研究 | 第36-39页 |
| 2.9.1 体外合成Mb NAG ds RNA | 第36-38页 |
| 2.9.2 ds RNA的体外注射 | 第38页 |
| 2.9.3 RNA干扰形态观察和死亡率 | 第38-39页 |
| 2.9.4 q PCR检测RNA干扰效果 | 第39页 |
| 2.10 荧光定量数据处理 | 第39-40页 |
| 3 结果与分析 | 第40-55页 |
| 3.1 Mb NAG c DNA的克隆 | 第40-42页 |
| 3.1.1 Mb NAG c DNA基因片段的克隆 | 第40页 |
| 3.1.2 Mb NAG 3′RACE和 5′RACE试验结果 | 第40-41页 |
| 3.1.3 Mb NAG全长试验结果 | 第41-42页 |
| 3.2 Mb NAG基因c DNA的序列分析 | 第42-43页 |
| 3.3 Mb NAG基因推导的蛋白特征分析 | 第43-48页 |
| 3.3.1 氨基酸序列组成分析 | 第43页 |
| 3.3.2 信号肽分析 | 第43-44页 |
| 3.3.3 Mb NAG基因的N位糖基化位点预测 | 第44页 |
| 3.3.4 氨基酸的疏水性分析 | 第44-45页 |
| 3.3.5 蛋白结构三维结构模型的建立 | 第45页 |
| 3.3.6 Mb NAG基因c DNA序列和氨基酸序列同源性比较及聚类分析 | 第45-48页 |
| 3.4 Mb NAG基因在大肠杆菌中的原核表达 | 第48-52页 |
| 3.4.1 Mb NAG基因重组表达载体的构建及鉴定 | 第48-49页 |
| 3.4.2 重组质粒Mb NAG-pet21b的诱导表达、纯化及Western blot验证 | 第49-51页 |
| 3.4.3 Mb NAG-pet21b重组蛋白的复性和活性检测 | 第51-52页 |
| 3.5 Mb NAG基因m RNA在不同组织和发育阶段的表达 | 第52-53页 |
| 3.6 蜕皮激素对Mb NAG基因表达量影响 | 第53页 |
| 3.7 RNAi研究结果 | 第53-55页 |
| 3.7.1 RNAi处理后基因表达量变化 | 第53-54页 |
| 3.7.2 RNAi处理后表现型变化及死亡率 | 第54-55页 |
| 4 讨论 | 第55-58页 |
| 4.1 Mb NAG基因的克隆及序列分析 | 第55页 |
| 4.2 Mb NAG基因的原核表达及活性分析 | 第55-56页 |
| 4.3 Mb NAG的不同龄期和不同组织表达研究 | 第56页 |
| 4.4 蜕皮激素对Mb NAG影响 | 第56页 |
| 4.5 Mb NAG基因的RNA干扰研究 | 第56-58页 |
| 5 结论 | 第58-59页 |
| 致谢 | 第59-60页 |
| 参考文献 | 第60-66页 |
| 攻读硕士学位期间发表的学术论文 | 第66页 |
