| 摘要 | 第5-7页 |
| abstract | 第7-8页 |
| 英文缩略表 | 第15-16页 |
| 第一章 绪论 | 第16-24页 |
| 1.1 猪圆环病毒概况 | 第17-18页 |
| 1.1.1 病原学 | 第17-18页 |
| 1.1.1.1 PCV2分类 | 第17页 |
| 1.1.1.2 PCV2形态结构及理化特性 | 第17页 |
| 1.1.1.3 PCV2基因组与蛋白质 | 第17-18页 |
| 1.1.2 PCV2致病性 | 第18页 |
| 1.2 猪鼻支原体概况 | 第18-19页 |
| 1.2.1 病原学 | 第18-19页 |
| 1.2.1.1 Mhr分类 | 第18页 |
| 1.2.1.2 Mhr的培养 | 第18页 |
| 1.2.1.3 Mhr的基因组和蛋白质 | 第18-19页 |
| 1.2.2 Mhr致病性 | 第19页 |
| 1.3 PCV2和Mhr共感染的研究进展 | 第19页 |
| 1.4 Mhr诊断技术 | 第19-22页 |
| 1.4.1 病原学方法 | 第20-22页 |
| 1.4.1.1 病原体的分离与鉴定 | 第20页 |
| 1.4.1.2 双抗夹心ELISA | 第20页 |
| 1.4.1.3 间接免疫荧光试验 | 第20页 |
| 1.4.1.4 胶体金免疫层析法 | 第20-21页 |
| 1.4.1.5 PCR方法 | 第21页 |
| 1.4.1.6 随机扩增多态性（RAPD）DNA技术 | 第21页 |
| 1.4.1.7 环介导等温扩增技术 | 第21页 |
| 1.4.1.8 实时荧光定量PCR方法 | 第21-22页 |
| 1.4.2 病原体抗体检测技术 | 第22页 |
| 1.4.2.1 间接血凝试验 | 第22页 |
| 1.4.2.2 酶联免疫吸附试验 | 第22页 |
| 1.5 研究目的和意义 | 第22-24页 |
| 第二章 猪鼻支原体抗体间接ELISA检测方法的建立及应用 | 第24-31页 |
| 摘要 | 第24页 |
| 2.1 材料与方法 | 第24-26页 |
| 2.1.1 菌株与血清来源 | 第24-25页 |
| 2.1.2 主要试剂和实验动物 | 第25页 |
| 2.1.3 菌体膜蛋白抗原的提取 | 第25页 |
| 2.1.4 间接ELISA反应术式 | 第25页 |
| 2.1.5 间接ELISA反应条件的确定 | 第25页 |
| 2.1.6 间接ELISA临界值的确定 | 第25-26页 |
| 2.1.7 血清交叉反应试验 | 第26页 |
| 2.1.8 间接ELISA特异性、敏感性及与IDEXX试剂盒平行检测试验 | 第26页 |
| 2.1.9 人工感染猪和临床血清样品的检测 | 第26页 |
| 2.2 结果 | 第26-29页 |
| 2.2.1 菌体膜蛋白抗原的提取及鉴定 | 第26-27页 |
| 2.2.2 ELISA反应条件优化 | 第27页 |
| 2.2.3 间接ELISA阴阳性临界值的确定 | 第27页 |
| 2.2.4 特异性、敏感性、交叉反应性及与IDEXX试剂盒平行检测试验 | 第27-28页 |
| 2.2.5 Mhr感染巴马猪血清抗体消长规律测定 | 第28页 |
| 2.2.6 对临床送检猪血清抗体的检测 | 第28-29页 |
| 2.3 讨论 | 第29-31页 |
| 第三章 猪鼻支原体膜蛋白单克隆抗体的制备及其抗原表位的鉴定 | 第31-45页 |
| 摘要 | 第31页 |
| 3.1 材料和方法 | 第31-39页 |
| 3.1.1 试验动物、菌株、质粒及试剂 | 第31-32页 |
| 3.1.2 单抗隆抗体的制备 | 第32-33页 |
| 3.1.2.1 小鼠免疫 | 第32页 |
| 3.1.2.2 饲养层细胞的制备 | 第32页 |
| 3.1.2.3 骨髓瘤细胞的制备 | 第32页 |
| 3.1.2.4 免疫脾细胞的制备 | 第32-33页 |
| 3.1.2.5 细胞融合 | 第33页 |
| 3.1.3 单克隆抗体的鉴定 | 第33-34页 |
| 3.1.3.1 阳性杂交瘤细胞的筛选 | 第33页 |
| 3.1.3.2 阳性杂交瘤细胞的亚克隆 | 第33页 |
| 3.1.3.3 细胞的冻存与复苏 | 第33-34页 |
| 3.1.3.4 单抗亚类鉴定及腹水制备 | 第34页 |
| 3.1.3.5 单克隆抗体的特异性鉴定 | 第34页 |
| 3.1.4 膜蛋白质谱分析 | 第34页 |
| 3.1.5 抗原表位的鉴定 | 第34-39页 |
| 3.1.5.1 丙酮酸脱氢酶 α 亚基目的基因片段扩增及产物回收纯化 | 第34-35页 |
| 3.1.5.2 Mhr-pd-α 基因序列的测定及定点突变 | 第35-36页 |
| 3.1.5.3 Mhr-pd-α 蛋白基因的表达和鉴定 | 第36页 |
| 3.1.5.4 Mhr-pd-α 基因的截短表达和多肽合成 | 第36-39页 |
| 3.2 结果 | 第39-43页 |
| 3.2.1 单抗效价的测定和亚类鉴定 | 第39页 |
| 3.2.2 单抗反应特性的鉴定 | 第39-40页 |
| 3.2.3 Mhr-pd-α 目的基因的PCR扩增及基因序列点突变 | 第40-41页 |
| 3.2.4 融合蛋白的SDS-PAGE和Western blot检测 | 第41页 |
| 3.2.5 截短蛋白的表达 | 第41-42页 |
| 3.2.6 合成肽分析 | 第42-43页 |
| 3.3 讨论 | 第43-45页 |
| 第四章 猪鼻支原体核酸检测荧光定量PCR方法的建立及其应用 | 第45-51页 |
| 摘要 | 第45页 |
| 4.1 材料和方法 | 第45-47页 |
| 4.1.1 病原体和试剂 | 第45页 |
| 4.1.2 引物设计与PCR扩增 | 第45-46页 |
| 4.1.3 制备标准质粒DNA模板 | 第46页 |
| 4.1.4 实时荧光定量PCR程序 | 第46页 |
| 4.1.5 标准曲线的建立 | 第46页 |
| 4.1.6 特异性、敏感性及重复性试验 | 第46-47页 |
| 4.1.7 与常规PCR比较试验 | 第47页 |
| 4.1.8 Mhr人工感染试验猪组织样品的检测 | 第47页 |
| 4.2 结果 | 第47-50页 |
| 4.2.1 实时定量PCR标准曲线 | 第47-48页 |
| 4.2.2 实时定量PCR特异性 | 第48页 |
| 4.2.3 实时荧光定量PCR敏感性与重复性试验 | 第48页 |
| 4.2.4 与常规PCR比较试验 | 第48-49页 |
| 4.2.5 Mhr人工感染试验猪猪体内病原体分布 | 第49-50页 |
| 4.3 讨论 | 第50-51页 |
| 第五章 猪鼻支原体与猪圆环病毒2型协同感染致病性试验 | 第51-63页 |
| 摘要 | 第51页 |
| 5.1 材料和方法 | 第51-53页 |
| 5.1.1 细胞和毒株 | 第51-52页 |
| 5.1.2 试剂和仪器 | 第52页 |
| 5.1.3 试验设计 | 第52页 |
| 5.1.4 解剖学病理变化 | 第52页 |
| 5.1.5 PCV2和Mhr核酸检测 | 第52-53页 |
| 5.1.6 PCV2和Mhr抗体检测 | 第53页 |
| 5.1.7 组织病理学分析 | 第53页 |
| 5.1.8 细胞因子检测 | 第53页 |
| 5.2 结果 | 第53-61页 |
| 5.2.1 临床表现 | 第53-54页 |
| 5.2.2 病理变化 | 第54-56页 |
| 5.2.2.1 解剖病变 | 第54-55页 |
| 5.2.2.2 组织病理变化 | 第55-56页 |
| 5.2.3 PCV2检测结果 | 第56-59页 |
| 5.2.3.1 PCV2病毒血症 | 第56-58页 |
| 5.2.3.2 PCV2在各脏器中的病毒含量 | 第58页 |
| 5.2.3.3 PCV2抗体消长规律 | 第58-59页 |
| 5.2.4 Mhr检测结果 | 第59-60页 |
| 5.2.4.1 Mhr抗体消长规律 | 第59-60页 |
| 5.2.4.2 Mhr在扁桃体和肺脏组织中的病毒含量 | 第60页 |
| 5.2.5 血液中细胞因子检测结果 | 第60-61页 |
| 5.3 讨论 | 第61-63页 |
| 第六章 全文结论 | 第63-64页 |
| 参考文献 | 第64-69页 |
| 致谢 | 第69-70页 |
| 作者简历 | 第70页 |
