| 摘要 | 第3-4页 |
| ABSTRACT | 第4-5页 |
| 前言 | 第9-10页 |
| 第一篇 文献综述 | 第10-30页 |
| 1 禽流感概述 | 第10页 |
| 2 禽流感病原学 | 第10-13页 |
| 2.1 理化学特性 | 第11-12页 |
| 2.2 培养特性 | 第12-13页 |
| 3 分子生物学特征 | 第13-16页 |
| 3.1 禽流感病毒基因组结构组特征 | 第13页 |
| 3.2 禽流感病毒编码的蛋白质及其功能 | 第13-16页 |
| 4 流行病学特征 | 第16-18页 |
| 4.1 传染源 | 第16页 |
| 4.2 传播途径 | 第16-17页 |
| 4.3 发病季节 | 第17页 |
| 4.4 生态学 | 第17-18页 |
| 4.5 水禽在禽流感病毒传播中的意义 | 第18页 |
| 5 临床症状与剖检特征 | 第18-20页 |
| 5.1 急性型 | 第19页 |
| 5.2 温和型 | 第19页 |
| 5.3 隐性型 | 第19页 |
| 5.4 病理变化 | 第19-20页 |
| 6 禽流感病毒的感染和分子致病机制 | 第20-26页 |
| 6.1 禽流感病毒的感染 | 第20-21页 |
| 6.2 分子致病机制 | 第21-26页 |
| 7 禽流感病毒的诊断 | 第26-30页 |
| 7.1 鉴别诊断 | 第26页 |
| 7.2 传统诊断技术 | 第26-28页 |
| 7.3 分子生物学诊断技术 | 第28-30页 |
| 第二篇 研究内容 | 第30-83页 |
| 第一章 鸭源H5N5亚型禽流感病毒的分离与鉴定 | 第30-44页 |
| 1 材料 | 第30-31页 |
| 1.1 病料及其来源 | 第30页 |
| 1.2 试剂 | 第30-31页 |
| 1.3 引物 | 第31页 |
| 1.4 仪器与设备 | 第31页 |
| 2 方法 | 第31-35页 |
| 2.1 病毒的分离 | 第31页 |
| 2.2 病毒的鉴定 | 第31-35页 |
| 3 结果 | 第35-40页 |
| 3.1 病毒的分离培养结果 | 第35-36页 |
| 3.2 胶体金试纸条检测结果 | 第36页 |
| 3.3 形态学鉴定 | 第36-37页 |
| 3.4 血清学鉴定 | 第37页 |
| 3.5 PCR扩增结果 | 第37-38页 |
| 3.6 PCR产物纯化、克隆、PCR鉴定与测序结果 | 第38页 |
| 3.7 HA与NA基因序列分析鉴定 | 第38-39页 |
| 3.8 血凝素和神经氨酸酶的基因系统进化分析 | 第39-40页 |
| 4 讨论 | 第40-43页 |
| 4.1 本研究病毒的分离 | 第40-41页 |
| 4.2 关于鸭源禽流感病毒的形态学观察 | 第41页 |
| 4.3 关于鸭源禽流感病毒的鉴定 | 第41-42页 |
| 4.4 鸭流感病毒的HA与NA基因序列分析 | 第42-43页 |
| 5 小结 | 第43-44页 |
| 第二章 鸭源H5N5亚型禽流感病毒聚合酶基因序列测定与分析 | 第44-69页 |
| 1 材料 | 第44-45页 |
| 1.1.病毒毒株 | 第44页 |
| 1.2 感受肽工程菌与载体 | 第44-45页 |
| 1.3 引物设计 | 第45页 |
| 1.4 主要试剂 | 第45页 |
| 1.5 主要仪器 | 第45页 |
| 2 方法 | 第45-49页 |
| 2.1 病毒培养 | 第45-46页 |
| 2.2 提取病毒总 RNA | 第46页 |
| 2.3 cDNA 的反转录 | 第46页 |
| 2.4 PCR扩增 | 第46-47页 |
| 2.5 胶回收 PCR 产物 | 第47页 |
| 2.6 连接与转化 PCR 产物 | 第47-48页 |
| 2.7 菌落PCR鉴定 | 第48页 |
| 2.8 质粒提取 | 第48-49页 |
| 2.9 基因的测序与分析 | 第49页 |
| 3 结果 | 第49-64页 |
| 3.1 PCR结果 | 第49-50页 |
| 3.2 菌落PCR结果 | 第50-52页 |
| 3.3 鸭源 H5N5 亚型 AIV 的 PB2 基因生物信息学分析 | 第52-54页 |
| 3.4 H5N5亚型鸭源禽流感病毒PB1基因生物信息学分析 | 第54-57页 |
| 3.5 H5N5亚型鸭源禽流感病毒PA基因生物信息学分析 | 第57-59页 |
| 3.6 H5N5亚型鸭源禽流感病毒NP基因生物信息学分析 | 第59-62页 |
| 3.7 同源性分析 | 第62-64页 |
| 4 讨论 | 第64-68页 |
| 4.1 PB2、PB1、PA、NP基因生物信息学分析 | 第64-65页 |
| 4.2 PB2基因序列分析 | 第65-66页 |
| 4.3 PB1 基因序列分析 | 第66-67页 |
| 4.4 PA基因序列分析 | 第67页 |
| 4.5 NP基因序列分析 | 第67-68页 |
| 5 小结 | 第68-69页 |
| 第三章 鸭源禽流感病毒聚合酶活性研究 | 第69-83页 |
| 1 材料 | 第69-70页 |
| 1.1 病毒毒株 | 第69页 |
| 1.2 载体、感受态细胞 | 第69-70页 |
| 1.3 引物 | 第70页 |
| 1.4 主要试剂 | 第70页 |
| 1.5 主要仪器 | 第70页 |
| 2 方法 | 第70-75页 |
| 2.1 PCR产物处理 | 第70-71页 |
| 2.2 载体处理 | 第71-72页 |
| 2.3 表达载体的构建 | 第72页 |
| 2.4 转化 | 第72-73页 |
| 2.5 菌落PCR鉴定 | 第73页 |
| 2.6 质粒提取 | 第73-74页 |
| 2.7 测序连接产物 | 第74页 |
| 2.8 PB2基因点突变 | 第74-75页 |
| 2.9 聚合酶蛋白活性检测 | 第75页 |
| 3 结果 | 第75-79页 |
| 3.1 PCR产物双酶切 | 第75-76页 |
| 3.2 菌落PCR | 第76-77页 |
| 3.3 连接产物测序 | 第77页 |
| 3.4 PB2基因点突变 | 第77页 |
| 3.5 聚合酶蛋白活性检测 | 第77-79页 |
| 4 分析与讨论 | 第79-82页 |
| 4.1 流感病毒的点突变 | 第79-80页 |
| 4.2 流感病毒突变后的聚合酶活性分析 | 第80-82页 |
| 5 小结 | 第82-83页 |
| 结论 | 第83-84页 |
| 参考文献 | 第84-96页 |
| 作者简介 | 第96-97页 |
| 致谢 | 第97页 |
