| 摘要 | 第3-5页 |
| Abstract | 第5-6页 |
| 符号说明 | 第9-10页 |
| 文献综述 | 第10-17页 |
| 1. REV概述 | 第10页 |
| 2. REV病原学 | 第10-12页 |
| 2.1 REV的核酸结构 | 第10-11页 |
| 2.2 REV的蛋白结构 | 第11页 |
| 2.3 REV的复制 | 第11-12页 |
| 3. REV流行病学 | 第12-14页 |
| 3.1 宿主 | 第12页 |
| 3.2 REV的传播 | 第12-13页 |
| 3.3 国内REV流行现状 | 第13-14页 |
| 4. REV的致病性 | 第14页 |
| 5. REV的诊断 | 第14-15页 |
| 5.1 REV的分离鉴定 | 第14-15页 |
| 5.2 血清学检测 | 第15页 |
| 5.3 分子诊断 | 第15页 |
| 6. REV的预防控制 | 第15-16页 |
| 6.1 免疫接种 | 第15页 |
| 6.2 防控措施 | 第15-16页 |
| 7. 本课题研究的目的和意义 | 第16-17页 |
| 研究内容一 | 第17-26页 |
| 1、材料 | 第17-18页 |
| 1.1、质粒及细胞 | 第17页 |
| 1.2、培养基及主要试剂 | 第17-18页 |
| 1.3、主要仪器 | 第18页 |
| 2、方法 | 第18-22页 |
| 2.1、引物的设计 | 第18页 |
| 2.2、PCR扩增 | 第18-19页 |
| 2.3、快速克隆转化 | 第19-20页 |
| 2.4、克隆鉴定 | 第20-21页 |
| 2.5、病毒的拯救 | 第21页 |
| 2.6、荧光鉴定 | 第21-22页 |
| 3、结果 | 第22-24页 |
| 3.1、引物的设计 | 第22页 |
| 3.2、EGFP基因及SNV线性化载体的PCR扩增 | 第22页 |
| 3.3、rREV-EGFP-Env传染性克隆的鉴定 | 第22-23页 |
| 3.4、表达EGFP基因的REV病毒的拯救与鉴定 | 第23-24页 |
| 4、小结与讨论 | 第24-26页 |
| 研究内容二 | 第26-43页 |
| 1、材料 | 第26-27页 |
| 1.1、质粒及细胞及试验动物 | 第26页 |
| 1.2、培养基 | 第26-27页 |
| 1.3、主要仪器 | 第27页 |
| 2、方法 | 第27-35页 |
| 2.1、引物的设计 | 第27-28页 |
| 2.2、PCR扩增 | 第28页 |
| 2.3、快速克隆转化 | 第28-29页 |
| 2.4、克隆鉴定 | 第29-30页 |
| 2.5、病毒的拯救 | 第30页 |
| 2.6、间接免疫荧光方法激光共聚焦鉴定病毒 | 第30页 |
| 2.7、细胞基因组的提取 | 第30-31页 |
| 2.8、PCR扩增H9流感病毒HA抗原表位片段 | 第31-32页 |
| 2.9、Env-HA融合蛋白的Western blot鉴定 | 第32页 |
| 2.10、REV-HA重组病毒TCID_(50)的测定 | 第32页 |
| 2.11、REV-HA重组病毒生长曲线的测定 | 第32-33页 |
| 2.12、鸡感染性实验 | 第33页 |
| 2.13、间接免疫荧光检测REV抗体 | 第33-34页 |
| 2.14、Western blot方法检测HA抗体 | 第34页 |
| 2.15、鸡感染流感病毒后的排毒检测 | 第34-35页 |
| 3、结果 | 第35-41页 |
| 3.1、引物的设计 | 第35页 |
| 3.2、流感病毒HA抗原表位基因的PCR扩增 | 第35页 |
| 3.3、rREV-HAep-Env传染性克隆的鉴定 | 第35-36页 |
| 3.4、间接免疫荧光方法激光共聚焦鉴定病毒 | 第36页 |
| 3.5、PCR扩增细胞基因组中H9流感病毒HA抗原表位片段 | 第36-37页 |
| 3.6、Env-HA融合蛋白的Western blot鉴定 | 第37-38页 |
| 3.7、生长曲线 | 第38-39页 |
| 3.8、SPF鸡感染性试验 | 第39-41页 |
| 4、小结与讨论 | 第41-43页 |
| 全文总结 | 第43-44页 |
| 参考文献 | 第44-48页 |
| 攻读学位期间取得的科研成果 | 第48-49页 |
| 致谢 | 第49-50页 |
