| 摘要 | 第4-5页 |
| ABSTRACT | 第5-6页 |
| 缩略词表 | 第7-10页 |
| 1 引言 | 第10-19页 |
| 1.1 猪流行性腹泻 | 第10-15页 |
| 1.1.1 PEDV的形态与分类 | 第10-11页 |
| 1.1.2 PEDV的理化与培养特性 | 第11页 |
| 1.1.3 PEDV的基因组结构 | 第11页 |
| 1.1.4 PEDV编码的主要结构蛋白 | 第11-12页 |
| 1.1.5 流行特点 | 第12页 |
| 1.1.6 临床症状与病理变化 | 第12-13页 |
| 1.1.7 PEDV的实验室检测技术 | 第13页 |
| 1.1.8 疫苗 | 第13-14页 |
| 1.1.9 防治 | 第14-15页 |
| 1.2 胶体金免疫层析技术 | 第15-17页 |
| 1.2.1 胶体金的特性及制备 | 第15页 |
| 1.2.2 免疫胶体金的制备 | 第15-16页 |
| 1.2.3 胶体金免疫层析技术在兽医传染病诊断中的应用 | 第16-17页 |
| 1.3 研究内容与技术路线 | 第17-18页 |
| 1.3.1 研究内容 | 第17页 |
| 1.3.2 技术路线 | 第17-18页 |
| 1.4 研究目的与意义 | 第18-19页 |
| 2 材料 | 第19-24页 |
| 2.1 单克隆抗体制备用材料 | 第19-22页 |
| 2.1.1 细胞、毒株及蛋白 | 第19页 |
| 2.1.2 实验动物 | 第19页 |
| 2.1.3 主要试剂与试剂盒 | 第19页 |
| 2.1.4 细胞培养用液 | 第19-20页 |
| 2.1.5 酶联免疫吸附试验（ELISA）相关试剂及配制 | 第20页 |
| 2.1.6 SDS-PAGE电泳用溶液 | 第20-21页 |
| 2.1.7 Western-Blotting用溶液 | 第21页 |
| 2.1.8 免疫组织化学试验所用试剂 | 第21-22页 |
| 2.2 胶体金免疫层析检测方法建立用材料 | 第22-23页 |
| 2.2.1 血清与临床检测样品 | 第22页 |
| 2.2.2 免疫层析材料 | 第22页 |
| 2.2.3 胶体金常用溶液 | 第22-23页 |
| 2.3 主要仪器设备 | 第23-24页 |
| 3 方法 | 第24-35页 |
| 3.1 猪流行性腹泻单克隆抗体的制备 | 第24-30页 |
| 3.1.1 单克隆抗体筛选间接ELISA方法的建立 | 第24-25页 |
| 3.1.2 PEDV N蛋白的表达与纯化 | 第25页 |
| 3.1.3 动物的免疫 | 第25-26页 |
| 3.1.4 SP2/0 细胞的准备 | 第26页 |
| 3.1.5 饲养细胞的制备 | 第26页 |
| 3.1.6 免疫脾细胞的制备 | 第26页 |
| 3.1.7 细胞融合 | 第26-27页 |
| 3.1.8 阳性杂交瘤细胞的筛选、克隆 | 第27页 |
| 3.1.9 阳性杂交瘤细胞的冻存与复苏 | 第27-28页 |
| 3.1.10 杂交瘤细胞染色体分析 | 第28页 |
| 3.1.11 单克隆抗体的鉴定 | 第28-29页 |
| 3.1.12 单克隆抗体的大量制备 | 第29-30页 |
| 3.1.13 单克隆抗体效价检测 | 第30页 |
| 3.1.14 腹水中单克隆抗体的纯化及蛋白含量的测定 | 第30页 |
| 3.2 胶体金免疫层析检测方法的建立 | 第30-35页 |
| 3.2.1 金颗粒的制备 | 第30-31页 |
| 3.2.2 单克隆抗体的胶体金标记 | 第31-33页 |
| 3.2.3 金标垫的制备 | 第33页 |
| 3.2.4 印膜 | 第33页 |
| 3.2.5 试纸条的组装与结果判定标准 | 第33-34页 |
| 3.2.6 试纸条的特异性与敏感性 | 第34页 |
| 3.2.7 初步应用 | 第34-35页 |
| 4 结果 | 第35-51页 |
| 4.1 PEDV抗体检测间接ELISA方法 | 第35-38页 |
| 4.1.1 最适抗原包被浓度与封闭液 | 第35页 |
| 4.1.2 最适待检血清与酶标抗体浓度 | 第35-36页 |
| 4.1.3 显色时间 | 第36页 |
| 4.1.4 判定标准 | 第36-37页 |
| 4.1.5 特异性与敏感性 | 第37-38页 |
| 4.2 PEDV N蛋白的表达与纯化 | 第38-39页 |
| 4.3 免疫小鼠的血清PEDV抗体 | 第39页 |
| 4.4 细胞融合与杂交瘤细胞的筛选 | 第39-40页 |
| 4.5 杂交瘤细胞的染色体 | 第40页 |
| 4.6 单克隆抗体的类型 | 第40-41页 |
| 4.7 单克隆抗体识别的抗原表位 | 第41-42页 |
| 4.8 单克隆抗体的免疫活性 | 第42-43页 |
| 4.9 单克隆抗体效价 | 第43-44页 |
| 4.10 杂交瘤细胞分泌抗体的稳定性 | 第44-45页 |
| 4.11 腹水的纯化及其蛋白含量 | 第45页 |
| 4.12 制备的胶体金及其质量 | 第45-46页 |
| 4.13 胶体金标记抗体的最适稳定量 | 第46-47页 |
| 4.14 胶体金标记抗体的最适pH值 | 第47-48页 |
| 4.15 检测线的抗体包被浓度 | 第48页 |
| 4.16 质控线的抗体包被浓度 | 第48-49页 |
| 4.17 包被液 | 第49页 |
| 4.18 试纸条的特异性与敏感性 | 第49-50页 |
| 4.19 初步应用 | 第50-51页 |
| 5 讨论 | 第51-54页 |
| 5.1 单克隆抗体的制备 | 第51-52页 |
| 5.2 金标抗体的制备 | 第52页 |
| 5.3 胶体金免疫层析检测方法的建立 | 第52-53页 |
| 5.4 试纸条的检测效果及存在问题 | 第53-54页 |
| 6 结论 | 第54-55页 |
| 参考文献 | 第55-62页 |
| 在读期间发表的学术论文 | 第62-63页 |
| 作者简介 | 第63-64页 |
| 致谢 | 第64-65页 |
