| 摘要 | 第4-6页 |
| ABSTRACT | 第6-7页 |
| 第一章 绪论 | 第12-24页 |
| 1.1 引言 | 第12-13页 |
| 1.2 β-内酰胺酶 | 第13-14页 |
| 1.3 金属β-内酰胺酶CcrA | 第14-16页 |
| 1.4 β-内酰胺类抗生素 | 第16-18页 |
| 1.4.1 头孢他啶 | 第16-17页 |
| 1.4.2 头孢噻肟 | 第17-18页 |
| 1.5 主要研究方法 | 第18-21页 |
| 1.5.1 荧光光谱法 | 第18-20页 |
| 1.5.2 紫外光谱法 | 第20页 |
| 1.5.3 分子对接 | 第20-21页 |
| 1.5.4 分子动力学模拟 | 第21页 |
| 1.6 本论文研究内容和意义 | 第21-24页 |
| 1.6.1 研究内容 | 第21-22页 |
| 1.6.2 研究目的及意义 | 第22-24页 |
| 第二章 CcrA酶的表达鉴定和分离纯化 | 第24-34页 |
| 2.1 引言 | 第24页 |
| 2.2 实验材料 | 第24-27页 |
| 2.2.1 工程菌 | 第24页 |
| 2.2.2 试剂 | 第24页 |
| 2.2.3 主要仪器及型号 | 第24-25页 |
| 2.2.4 溶液的配制 | 第25-27页 |
| 2.3 实验方法 | 第27-30页 |
| 2.3.1 CcrA酶的诱导表达 | 第27页 |
| 2.3.2 聚丙烯酰胺凝胶电泳法(SDS-PAGE)检测蛋白的表达 | 第27-28页 |
| 2.3.3 包涵体的洗涤和溶解 | 第28-29页 |
| 2.3.4 包涵体的变性、复性和分离纯化 | 第29页 |
| 2.3.5 CcrA酶的含量测定 | 第29-30页 |
| 2.3.6 CcrA酶对两种抗生素的水解动力学 | 第30页 |
| 2.4 结果与分析 | 第30-32页 |
| 2.4.1 CcrA酶的表达和纯化分析 | 第30-32页 |
| 2.4.2 CcrA酶的含量测定结果 | 第32页 |
| 2.4.3 CcrA酶对两种抗生素水解活性结果分析 | 第32页 |
| 2.5 本章小结 | 第32-34页 |
| 第三章 CcrA酶与CTX结合过程的分子识别和相互作用研究 | 第34-48页 |
| 3.1 引言 | 第34页 |
| 3.2 仪器及试剂 | 第34-35页 |
| 3.2.1 实验仪器 | 第34页 |
| 3.2.2 实验试剂 | 第34-35页 |
| 3.2.3 溶液配制 | 第35页 |
| 3.3 实验方法 | 第35-37页 |
| 3.3.1 CcrA酶和CTX的结合实验 | 第35页 |
| 3.3.2 CcrA酶和CTX结合过程的内源荧光光谱测定 | 第35页 |
| 3.3.3 CcrA酶和CTX结合过程的同步荧光光谱测定 | 第35页 |
| 3.3.4 分子动力学模拟及分子对接 | 第35-37页 |
| 3.4 实验结果与讨论 | 第37-46页 |
| 3.4.1 CcrA酶和CTX结合过程的荧光发射光谱分析 | 第37页 |
| 3.4.2 CcrA酶和CTX结合过程的同步荧光光谱分析 | 第37-39页 |
| 3.4.3 CcrA酶和CTX相互作用的荧光猝灭类型 | 第39-40页 |
| 3.4.4 CcrA酶和CTX相互作用的结合常数和结合位点数 | 第40-41页 |
| 3.4.5 CcrA酶和CTX相互作用的热力学参数 | 第41-42页 |
| 3.4.6 CcrA酶分子中氨基酸残基的波动性 | 第42-43页 |
| 3.4.7 CcrA酶与CTX相互作用的分子对接结果 | 第43-45页 |
| 3.4.8 CcrA酶构象变化 | 第45-46页 |
| 3.5 本章小结 | 第46-48页 |
| 第四章 CcrA酶与CAZ结合过程的分子识别和相互作用研究 | 第48-60页 |
| 4.1 引言 | 第48页 |
| 4.2 仪器及试剂 | 第48-49页 |
| 4.2.1 实验仪器 | 第48页 |
| 4.2.2 实验试剂 | 第48页 |
| 4.2.3 溶液配制 | 第48-49页 |
| 4.3 实验方法 | 第49-50页 |
| 4.3.1 CcrA酶和CAZ的结合实验 | 第49页 |
| 4.3.2 CcrA酶和CAZ结合过程的内源荧光光谱的测定 | 第49页 |
| 4.3.3 CcrA酶和CAZ结合过程的同步荧光光谱的测定 | 第49页 |
| 4.3.4 分子动力学模拟与分子对接 | 第49-50页 |
| 4.4 实验结果与讨论 | 第50-57页 |
| 4.4.1 CcrA酶和CAZ结合过程的荧光发射光谱分析 | 第50-51页 |
| 4.4.2 CcrA酶和CAZ结合过程的同步荧光光谱分析 | 第51-52页 |
| 4.4.3 CcrA酶和CAZ相互作用的荧光猝灭类型 | 第52-53页 |
| 4.4.4 CcrA酶和CAZ相互作用的结合常数和结合位点数 | 第53-54页 |
| 4.4.5 CcrA酶和CAZ相互作用的热力学参数 | 第54-55页 |
| 4.4.6 CcrA酶和CAZ相互作用的分子对接结果 | 第55-57页 |
| 4.4.7 CcrA酶构象变化 | 第57页 |
| 4.5 本章小结 | 第57-60页 |
| 第五章 CcrA酶与CAZ和CTX两个结合体系的比较 | 第60-64页 |
| 5.1 引言 | 第60页 |
| 5.2 荧光猝灭常数Ksv和猝灭速率常数K_q | 第60页 |
| 5.3 结合常数和结合位点的比较 | 第60-61页 |
| 5.4 分子对接比较 | 第61-63页 |
| 5.5 本章小结 | 第63-64页 |
| 全文总结 | 第64-66页 |
| 参考文献 | 第66-76页 |
| 攻读博士/硕士学位期间取得的科研成果 | 第76-78页 |
| 致谢 | 第78页 |
