摘要 | 第4-6页 |
Abstract | 第6-7页 |
第1章 文献综述 | 第11-23页 |
1.1 MDV病原学 | 第11-12页 |
1.2 MDV的基因组学 | 第12-16页 |
1.2.1 MDV基因组结构 | 第12-13页 |
1.2.2 MDV编码蛋白与功能 | 第13-15页 |
1.2.3 MDV转录组学研究进展 | 第15-16页 |
1.3 致病机理 | 第16-17页 |
1.3.1 早期增殖性-限制性感染期 | 第16页 |
1.3.2 潜伏感染期 | 第16页 |
1.3.3 晚期溶细胞感染免疫抑制期 | 第16-17页 |
1.3.4 淋巴瘤形成期 | 第17页 |
1.4 流行病学 | 第17-19页 |
1.4.1 流行病学概况 | 第17页 |
1.4.2 毒力演化 | 第17-18页 |
1.4.3 MDV与REV或ALV间的基因重组 | 第18-19页 |
1.5 MDV感染的诊断 | 第19-20页 |
1.5.1 MDV的分离培养 | 第19页 |
1.5.2 MDV抗原的检测 | 第19-20页 |
1.5.3 MDV分子生物学诊断 | 第20页 |
1.6 MDV的防控 | 第20页 |
1.7 本研究目的及意义 | 第20-23页 |
第2章 MDV毒株的分离鉴定及分子进化分析 | 第23-39页 |
2.1 材料 | 第23-25页 |
2.1.1 病料和鸡胚 | 第23页 |
2.1.2 主要试剂 | 第23-24页 |
2.1.3 主要仪器设备 | 第24-25页 |
2.2 方法 | 第25-31页 |
2.2.1 引物设计与合成 | 第25页 |
2.2.2 临床诊断与病料采集 | 第25-26页 |
2.2.3 CEF细胞的制备 | 第26页 |
2.2.4 病毒分离及培养 | 第26页 |
2.2.5 间接免疫荧光实验(IFA) | 第26-27页 |
2.2.6 PCR鉴定 | 第27-28页 |
2.2.7 基因克隆与测序 | 第28-29页 |
2.2.8 系统发生树的构建与分析 | 第29-31页 |
2.3 结果 | 第31-38页 |
2.3.1 MD疑似病例鸡的临床剖检病变及确诊 | 第31-32页 |
2.3.2 MDV流行毒株的分离与鉴定 | 第32页 |
2.3.3 MDV分离株的PCR扩增及基因序列分析 | 第32-34页 |
2.3.4 基于meq、gE和gI基因的遗传进化分析 | 第34-38页 |
2.4 讨论 | 第38-39页 |
第3章 GX0101感染宿主模型的建立及致病阶段分析 | 第39-53页 |
3.1 材料 | 第40页 |
3.1.1 毒株、鸡胚和SPF鸡 | 第40页 |
3.1.2 主要试剂和仪器 | 第40页 |
3.2 方法 | 第40-45页 |
3.2.1 GX0101毒力效价测定 | 第40-41页 |
3.2.2 SPF鸡的人工攻毒实验及样品采集 | 第41页 |
3.2.3 引物设计与合成 | 第41-42页 |
3.2.4 RNA制备及质量检测 | 第42-43页 |
3.2.5 cDNA合成 | 第43页 |
3.2.6 qPCR | 第43-45页 |
3.3 结果 | 第45-51页 |
3.3.1 MDV攻毒实验结果 | 第45页 |
3.3.2 RNA提取鉴定结果 | 第45-47页 |
3.3.3 qPCR条件优化结果 | 第47页 |
3.3.4 MDV基因相对表达水平分析结果 | 第47-51页 |
3.4 讨论 | 第51-53页 |
第4章 GX0101感染宿主的病毒动态转录组学研究 | 第53-65页 |
4.1 材料 | 第53页 |
4.1.1 RNA样品 | 第53页 |
4.1.2 主要试剂和仪器 | 第53页 |
4.2 方法 | 第53-58页 |
4.2.1 RNA测序样品质量检测 | 第53-54页 |
4.2.2 文库构建和上机测序 | 第54-55页 |
4.2.3 数据过滤 | 第55页 |
4.2.4 比对分析 | 第55-56页 |
4.2.5 表达量分析 | 第56页 |
4.2.6 差异表达分析 | 第56页 |
4.2.7 qPCR验证DEGs | 第56-58页 |
4.3 结果 | 第58-63页 |
4.3.1 数据过滤 | 第58页 |
4.3.2 比对分析 | 第58-59页 |
4.3.3 表达量分析 | 第59页 |
4.3.4 差异表达分析 | 第59-61页 |
4.3.5 qPCR验证 | 第61-63页 |
4.4 讨论 | 第63-65页 |
第5章 结论 | 第65-67页 |
参考文献 | 第67-73页 |
附录I GX0101感染鸡病毒基因RNA-Seq结果 | 第73-81页 |
致谢 | 第81-83页 |
攻读学位期间的研究成果 | 第83页 |