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MDV流行毒株分离鉴定及GX0101感染宿主的病毒动态转录组学研究

摘要第4-6页
Abstract第6-7页
第1章 文献综述第11-23页
    1.1 MDV病原学第11-12页
    1.2 MDV的基因组学第12-16页
        1.2.1 MDV基因组结构第12-13页
        1.2.2 MDV编码蛋白与功能第13-15页
        1.2.3 MDV转录组学研究进展第15-16页
    1.3 致病机理第16-17页
        1.3.1 早期增殖性-限制性感染期第16页
        1.3.2 潜伏感染期第16页
        1.3.3 晚期溶细胞感染免疫抑制期第16-17页
        1.3.4 淋巴瘤形成期第17页
    1.4 流行病学第17-19页
        1.4.1 流行病学概况第17页
        1.4.2 毒力演化第17-18页
        1.4.3 MDV与REV或ALV间的基因重组第18-19页
    1.5 MDV感染的诊断第19-20页
        1.5.1 MDV的分离培养第19页
        1.5.2 MDV抗原的检测第19-20页
        1.5.3 MDV分子生物学诊断第20页
    1.6 MDV的防控第20页
    1.7 本研究目的及意义第20-23页
第2章 MDV毒株的分离鉴定及分子进化分析第23-39页
    2.1 材料第23-25页
        2.1.1 病料和鸡胚第23页
        2.1.2 主要试剂第23-24页
        2.1.3 主要仪器设备第24-25页
    2.2 方法第25-31页
        2.2.1 引物设计与合成第25页
        2.2.2 临床诊断与病料采集第25-26页
        2.2.3 CEF细胞的制备第26页
        2.2.4 病毒分离及培养第26页
        2.2.5 间接免疫荧光实验(IFA)第26-27页
        2.2.6 PCR鉴定第27-28页
        2.2.7 基因克隆与测序第28-29页
        2.2.8 系统发生树的构建与分析第29-31页
    2.3 结果第31-38页
        2.3.1 MD疑似病例鸡的临床剖检病变及确诊第31-32页
        2.3.2 MDV流行毒株的分离与鉴定第32页
        2.3.3 MDV分离株的PCR扩增及基因序列分析第32-34页
        2.3.4 基于meq、gE和gI基因的遗传进化分析第34-38页
    2.4 讨论第38-39页
第3章 GX0101感染宿主模型的建立及致病阶段分析第39-53页
    3.1 材料第40页
        3.1.1 毒株、鸡胚和SPF鸡第40页
        3.1.2 主要试剂和仪器第40页
    3.2 方法第40-45页
        3.2.1 GX0101毒力效价测定第40-41页
        3.2.2 SPF鸡的人工攻毒实验及样品采集第41页
        3.2.3 引物设计与合成第41-42页
        3.2.4 RNA制备及质量检测第42-43页
        3.2.5 cDNA合成第43页
        3.2.6 qPCR第43-45页
    3.3 结果第45-51页
        3.3.1 MDV攻毒实验结果第45页
        3.3.2 RNA提取鉴定结果第45-47页
        3.3.3 qPCR条件优化结果第47页
        3.3.4 MDV基因相对表达水平分析结果第47-51页
    3.4 讨论第51-53页
第4章 GX0101感染宿主的病毒动态转录组学研究第53-65页
    4.1 材料第53页
        4.1.1 RNA样品第53页
        4.1.2 主要试剂和仪器第53页
    4.2 方法第53-58页
        4.2.1 RNA测序样品质量检测第53-54页
        4.2.2 文库构建和上机测序第54-55页
        4.2.3 数据过滤第55页
        4.2.4 比对分析第55-56页
        4.2.5 表达量分析第56页
        4.2.6 差异表达分析第56页
        4.2.7 qPCR验证DEGs第56-58页
    4.3 结果第58-63页
        4.3.1 数据过滤第58页
        4.3.2 比对分析第58-59页
        4.3.3 表达量分析第59页
        4.3.4 差异表达分析第59-61页
        4.3.5 qPCR验证第61-63页
    4.4 讨论第63-65页
第5章 结论第65-67页
参考文献第67-73页
附录I GX0101感染鸡病毒基因RNA-Seq结果第73-81页
致谢第81-83页
攻读学位期间的研究成果第83页

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