| 摘要 | 第3-5页 |
| Abstract | 第5-7页 |
| 符号表 | 第8-12页 |
| 第1章 文献综述 | 第12-22页 |
| 1.1 传染性法氏囊病 | 第12-15页 |
| 1.1.1 传染性法氏囊病的研究概况 | 第12-13页 |
| 1.1.2 传染性法氏囊病病毒VP4蛋白的分子特性和蛋白酶活性 | 第13-15页 |
| 1.2 病毒感染与线粒体能量代谢 | 第15-20页 |
| 1.2.1 线粒体的研究进程 | 第15-17页 |
| 1.2.2 线粒体呼吸链复合物I | 第17页 |
| 1.2.3 NADH/NAD+的比值 | 第17-18页 |
| 1.2.4 肉碱酯酰转移酶与脂酰CoA转运 | 第18-19页 |
| 1.2.5 病毒感染对线粒体的影响 | 第19-20页 |
| 1.3 DT40细胞的研究概况 | 第20-21页 |
| 1.4 展望 | 第21-22页 |
| 第2章 IBDV感染对B淋巴细胞线粒体能量代谢的影响 | 第22-34页 |
| 2.1 实验材料 | 第22-23页 |
| 2.1.1 病毒毒株和细胞 | 第22页 |
| 2.1.2 实验试剂 | 第22-23页 |
| 2.1.3 实验主要试剂的配制 | 第23页 |
| 2.1.4 主要实验器材 | 第23页 |
| 2.2 实验方法 | 第23-27页 |
| 2.2.1 病毒感染DT40细胞 | 第23-24页 |
| 2.2.2 细胞线粒体的分离及蛋白含量的测定 | 第24页 |
| 2.2.3 线粒体的完整性检测 | 第24页 |
| 2.2.4 细胞ATP含量的测定 | 第24-25页 |
| 2.2.5 细胞线粒体酶活性的测定 | 第25-26页 |
| 2.2.6 细胞脂酰-Co A含量的测定 | 第26-27页 |
| 2.2.7 细胞中NADH和NAD+的提取和检测 | 第27页 |
| 2.3 结果与分析 | 第27-32页 |
| 2.3.1 IBDV感染DT40细胞线粒体完整性检测 | 第27-29页 |
| 2.3.2 线粒体蛋白和ATP的含量 | 第29-30页 |
| 2.3.3 细胞线粒体酶活性的测定 | 第30-31页 |
| 2.3.4 细胞线粒体脂酰-CoA含量和NADH/NAD+比值 | 第31-32页 |
| 2.4 讨论 | 第32-34页 |
| 第3章 IBDV感染对鸡胚肝脏细胞线粒体能量代谢的影响 | 第34-46页 |
| 3.1 实验材料 | 第34-35页 |
| 3.1.1 实验鸡胚及IBDV病毒 | 第34页 |
| 3.1.2 实验试剂 | 第34页 |
| 3.1.3 实验主要试剂的配制 | 第34-35页 |
| 3.1.4 主要实验器材 | 第35页 |
| 3.2 实验方法 | 第35-38页 |
| 3.2.1 鸡胚孵育及传代培养 | 第35-36页 |
| 3.2.2 鸡胚感染IBDV的RT-PCR鉴定 | 第36页 |
| 3.2.3 鸡胚肝脏的线粒体分离和蛋白含量的测定 | 第36-37页 |
| 3.2.4 鸡胚肝脏线粒体ATP含量的测定 | 第37页 |
| 3.2.5 鸡胚肝脏线粒体酶活性的测定 | 第37页 |
| 3.2.6 鸡胚肝脏脂酰-CoA含量的测定 | 第37页 |
| 3.2.7 鸡胚肝脏NADH和NAD+的提取和检测 | 第37页 |
| 3.2.8 鸡胚肝脏丙酮酸和乳酸的检测 | 第37-38页 |
| 3.3 结果与分析 | 第38-43页 |
| 3.3.1 鸡胚感染IBDV的RT-PCR鉴定和传代实验 | 第38-39页 |
| 3.3.2 鸡胚线粒体蛋白和ATP的含量 | 第39-41页 |
| 3.3.3 鸡胚线粒体酶活性测定 | 第41页 |
| 3.3.4 细胞线粒体脂酰-CoA含量和NADH/NAD+比值 | 第41-43页 |
| 3.3.5 鸡胚肝脏丙酮酸和乳酸的检测 | 第43页 |
| 3.4 讨论 | 第43-46页 |
| 第4章 IBDV-VP4蛋白真核表达载体的构建和表达及其对DT40细胞线粒体能量代谢的影响 | 第46-64页 |
| 4.1 实验材料 | 第46-49页 |
| 4.1.1 菌株、载体及试剂 | 第46-47页 |
| 4.1.2 主要实验仪器 | 第47页 |
| 4.1.3 主要试剂的配制 | 第47-49页 |
| 4.2 实验方法 | 第49-53页 |
| 4.2.1 IBDV-VP4基因的扩增 | 第49-50页 |
| 4.2.2 CaCl_2法制备JM-109 感受态细胞 | 第50页 |
| 4.2.3 克隆载体pMD-19T-VP4的构建与鉴定 | 第50-51页 |
| 4.2.4 真核表达载体pcDNA3.0-VP4的构建与鉴定 | 第51页 |
| 4.2.5 真核表达载体pcDNA3.0-VP4转染DT40细胞 | 第51-52页 |
| 4.2.6 表达产物VP4蛋白的分析和检测 | 第52-53页 |
| 4.2.7 线粒体的完整性检测 | 第53页 |
| 4.2.8 转染pcDNA3.0-VP4的细胞线粒体的分离和线粒体蛋白的测定 | 第53页 |
| 4.2.9 转染pcDNA3.0-VP4的细胞ATP含量的测定 | 第53页 |
| 4.2.10 转染pcDNA3.0-VP4的细胞线粒体酶活性的测定 | 第53页 |
| 4.2.11 转染pcDNA3.0-VP4的细胞脂酰-CoA含量的测定 | 第53页 |
| 4.2.12 转染pcDNA3.0-VP4的细胞中NADH和NAD+的提取和检测 | 第53页 |
| 4.2.13 转染pcDNA3.0-VP4的细胞中丙酮酸和乳酸的检测 | 第53页 |
| 4.3 结果与分析 | 第53-61页 |
| 4.3.1 IBDV VP4基因的扩增 | 第53-54页 |
| 4.3.2 重组质粒pMD-19T- VP4的PCR鉴定和双酶切鉴定 | 第54-55页 |
| 4.3.3 重组质粒pc DNA3.0-VP4的PCR鉴定和双酶切鉴定 | 第55页 |
| 4.3.4 重组质粒pc DNA3.0-VP4表达产物的鉴定 | 第55-56页 |
| 4.3.5 转染pcDNA3.0-VP4细胞线粒体完整性检测 | 第56-58页 |
| 4.3.6 转染pcDNA3.0-VP4细胞的线粒体分离和ATP的测定 | 第58-59页 |
| 4.3.7 转染pcDNA3.0-VP4细胞酶活性的测定 | 第59页 |
| 4.3.8 转染pcDNA3.0-VP4细胞脂酰-CoA含量和NADH/NAD+比值 | 第59-61页 |
| 4.3.9 转染pcDNA3.0-VP4的细胞中丙酮酸和乳酸的检测 | 第61页 |
| 4.4 讨论 | 第61-64页 |
| 第5章 结论 | 第64-66页 |
| 参考文献 | 第66-72页 |
| 致谢 | 第72-74页 |
| 攻读学位期间的研究成果 | 第74页 |
