| 摘要 | 第5-6页 |
| ABSTRACT | 第6页 |
| 第一章 总论 | 第10-29页 |
| 1.1 蛋白质激酶简介 | 第10页 |
| 1.2 受体型蛋白质激酶 | 第10-18页 |
| 1.2.1 EGFR及其下游信号级联反应 | 第11-13页 |
| 1.2.2 EGFR突变不是随机的 | 第13-15页 |
| 1.2.3 NSCLC中的激酶突变 | 第15页 |
| 1.2.4 受体酪氨酸激酶（RTKs)是重要的药物勒点 | 第15-16页 |
| 1.2.5 针对异常型EGFR的癌症治疗 | 第16-18页 |
| 1.2.5.1 EGFR激酶抑制剂 | 第17页 |
| 1.2.5.2 单克隆抗体 | 第17-18页 |
| 1.2.5.3 EGFR次级突变-猫和老鼠的游戏 | 第18页 |
| 1.2.6 EGFR下游突变 | 第18页 |
| 1.3 磷酸酰肌醇3-激酶(PI3K)家族 | 第18-23页 |
| 1.3.1 PI3K调节机制 | 第19页 |
| 1.3.2 PI3K下游信号通路 | 第19-20页 |
| 1.3.3 PI3K通路在肿瘤细胞中的误调节 | 第20-21页 |
| 1.3.4 ERBB3和PI3K信号的活化作为TKIs靶点EGFR和HER2的获得性耐药机理 | 第21-22页 |
| 1.3.5 癌症中与PI3K并发的相关基因改变及治疗影响 | 第22页 |
| 1.3.6 在不同的遗传界定的癌症中单一试剂PI3K抑制疗法和联合治疗相比较 | 第22-23页 |
| 1.4 激酶体外高通量药物筛选方法研究现状 | 第23-29页 |
| 1.4.1 高通量药物筛选方法学研究 | 第23-24页 |
| 1.4.2 激酶体外活性检测方式及相应技术平台 | 第24-26页 |
| 1.4.3 EZ Reader药物筛选系统迁移率检测技术原理 | 第26-27页 |
| 1.4.4 生物发光法在激酶活性检测中的应用 | 第27-29页 |
| 第二章 表皮生长因子受体EGFR及其EGFR(T790M/L858R)突变 | 第29-45页 |
| 2.1 主要试剂和实验材料 | 第29-31页 |
| 2.1.1 主要试剂 | 第29页 |
| 2.1.2 蛋白激酶及底物 | 第29页 |
| 2.1.3 主要仪器和设备 | 第29页 |
| 2.1.4 软件 | 第29页 |
| 2.1.5 常用试剂溶液 | 第29-31页 |
| 2.2 实验方法 | 第31-33页 |
| 2.2.1 EZ Reader LabChip技术激酶活性检测实验 | 第31-33页 |
| 2.2.1.1 优化底物浓度 | 第31页 |
| 2.2.1.2 拟定反应进程曲线图 | 第31页 |
| 2.2.1.3 ATP Km值的确定 | 第31页 |
| 2.2.1.4 DMSO耐受度测试 | 第31-32页 |
| 2.2.1.5 有效性验证实验 | 第32页 |
| 2.2.1.6 Z因子检测实验 | 第32-33页 |
| 2.3 EGFR EZ Reader LabChip技术激酶活性检测结果 | 第33-41页 |
| 2.3.1 构建前准备 | 第33-34页 |
| 2.3.1.1 底物浓度的优化 | 第33页 |
| 2.3.1.2 EGFR和EGFR(T790M,L858R)底物选择 | 第33-34页 |
| 2.3.2 EGFR和EGFR(T790M,L858R)高通量药物筛选模型构建 | 第34-41页 |
| 2.3.2.1 拟定反应进程曲线图 | 第35页 |
| 2.3.2.2 ATP Km值的确定 | 第35-37页 |
| 2.3.2.3 DMSO耐受度测试 | 第37-38页 |
| 2.3.2.4 有效性验证实验 | 第38-40页 |
| 2.3.2.5 Z因子测定-系统稳定性与可靠性评估 | 第40-41页 |
| 2.4 讨论 | 第41-45页 |
| 2.4.1 EGFR T790M突变：TKI治疗中引起获得性耐药的一个原因 | 第41-42页 |
| 2.4.2 EGFR T790M突变作为一个致癌剂 | 第42-43页 |
| 2.4.3 克服由T790M突变产生的耐药性策略 | 第43页 |
| 2.4.4 MET放大及针对TKI治疗获得性耐药的其它机制 | 第43-45页 |
| 第三章 PI3K家族生化筛选模型的建立 | 第45-62页 |
| 3.1 主要试剂和实验材料 | 第45页 |
| 3.2 实验方法 | 第45-47页 |
| 3.2.1 选择最佳底物 | 第45页 |
| 3.2.2 优化酶用量 | 第45页 |
| 3.2.3 优化底物用量 | 第45页 |
| 3.2.4 有效性验证实验 | 第45-46页 |
| 3.2.5 Z因子检测实验 | 第46页 |
| 3.2.6 ADP Glo激酶活性检测实验数据分析方法 | 第46-47页 |
| 3.3 构建前准备 | 第47-48页 |
| 3.3.1 ADP-Glo Plus激酶发光试剂盒ATP到ADP转换的标准曲线 | 第47页 |
| 3.3.2 反应缓冲液成分优化 | 第47-48页 |
| 3.4 PI3Kalhpa和PI3Kgamma高通量药物筛选模型构建 | 第48-53页 |
| 3.4.1 优化PI3Kalhpa和PI3Kgamma的酶量 | 第49-50页 |
| 3.4.2 优化PI3Kalhpa和PI3Kgamma底物PIP2的用量 | 第50页 |
| 3.4.3 有效性验证 | 第50-52页 |
| 3.4.4 Z因子测定 | 第52-53页 |
| 3.5 PI3Kbeta和PI3Kdelta高通量药物筛选模型构建 | 第53-57页 |
| 3.5.1 PI3Kbeta和PI3Kdelta反应缓冲液成分优化 | 第53-54页 |
| 3.5.2 PI3Kbeta和PI3Kdelta酶用量优化 | 第54-56页 |
| 3.5.3 PI3Kbeta和PI3Kdelta底物PIP2优化 | 第56页 |
| 3.5.4 PI3Kbeta和PI3Kdelta有效性验证 | 第56-57页 |
| 3.6 讨论 | 第57-62页 |
| 3.6.1 PI3Ks类型Ⅰ激酶 | 第57-59页 |
| 3.6.2 PIK3CA肿瘤特异性突变 | 第59-60页 |
| 3.6.3 PIK3CA癌症特异性突变的的遗传学特征 | 第60-61页 |
| 3.6.4 p110小分子抑制剂的演变进展 | 第61-62页 |
| 第四章 结论 | 第62-64页 |
| 主要英文缩略语索引 | 第64-66页 |
| 致谢 | 第66-67页 |
| 参考文献 | 第67-76页 |
