| 缩略词 | 第4-5页 |
| 致谢 | 第5-9页 |
| 摘要 | 第9-11页 |
| 1 文献综述 | 第11-19页 |
| 1.1 冠状病毒 | 第11-12页 |
| 1.2 猪δ冠状病毒 | 第12-14页 |
| 1.2.1 猪δ冠状病毒发现与流行状况 | 第12-13页 |
| 1.2.2 猪δ冠状病毒基因组特征 | 第13页 |
| 1.2.3 猪δ冠状病毒感染临床症状 | 第13-14页 |
| 1.2.4 猪δ冠状病毒的诊断方法 | 第14页 |
| 1.3 冠状病毒结构蛋白 | 第14-16页 |
| 1.3.1 Spike刺突糖蛋白 | 第14-15页 |
| 1.3.2 M蛋白 | 第15页 |
| 1.3.3 E蛋白 | 第15页 |
| 1.3.4 N蛋白 | 第15-16页 |
| 1.4 大肠杆菌表达系统及融合标签 | 第16-19页 |
| 1.4.1 多聚组氨酸标签 | 第17页 |
| 1.4.2 Grifin标签 | 第17页 |
| 1.4.3 GST标签 | 第17页 |
| 1.4.4 MBP标签 | 第17-18页 |
| 1.4.5 SUMO标签 | 第18页 |
| 1.4.6 Thioredoxin标签 | 第18页 |
| 1.4.7 γ-crystallin标签 | 第18页 |
| 1.4.8 ArsC标签 | 第18页 |
| 1.4.9 PpiB标签 | 第18-19页 |
| 2 引言 | 第19-20页 |
| 3 材料与方法 | 第20-30页 |
| 3.1 材料 | 第20-23页 |
| 3.1.1 质粒和菌株 | 第20页 |
| 3.1.2 主要仪器设备 | 第20页 |
| 3.1.3 试剂 | 第20-23页 |
| 3.1.3.1 主要试剂 | 第20-21页 |
| 3.1.3.2 常规试剂及配制方法 | 第21-23页 |
| 3.2 冠状病毒E蛋白的载体构建与表达 | 第23-26页 |
| 3.2.1 合成目的基因 | 第23页 |
| 3.2.2 PDCoV的E蛋白可溶性鉴定 | 第23-24页 |
| 3.2.2.1 诱导表达 | 第23-24页 |
| 3.2.2.2 纯化蛋白 | 第24页 |
| 3.2.3 构建冠状病毒E蛋白载体 | 第24-25页 |
| 3.2.3.1 引物设计与合成 | 第24页 |
| 3.2.3.2 PCR扩增 | 第24-25页 |
| 3.2.3.3 构建重组质粒His-CoVE | 第25页 |
| 3.2.4 冠状病毒E蛋白的表达与纯化 | 第25-26页 |
| 3.2.4.1 冠状病毒E蛋白的表达 | 第25-26页 |
| 3.2.4.2 冠状病毒E蛋白的纯化 | 第26页 |
| 3.3 冠状病毒S1蛋白的载体构建与表达 | 第26-28页 |
| 3.3.1 合成目的基因 | 第26页 |
| 3.3.2 PDCoV的S1蛋白可溶性鉴定 | 第26-27页 |
| 3.3.3 构建冠状病毒S1蛋白的载体 | 第27页 |
| 3.3.4 冠状病毒S1蛋白的表达与纯化 | 第27-28页 |
| 3.3.4.1 冠状病毒S1蛋白的可溶性标签筛选 | 第27-28页 |
| 3.3.4.2 冠状病毒S1蛋白的纯化 | 第28页 |
| 3.4 冠状病毒E和S1蛋白免疫作用的研究 | 第28-30页 |
| 3.4.1 冠状病毒E和S1蛋白疫苗的制备 | 第28页 |
| 3.4.2 动物分组及免疫 | 第28页 |
| 3.4.3 冠状病毒E和S1蛋白免疫效果 | 第28-29页 |
| 3.4.4 免疫血清抗体效价检测 | 第29-30页 |
| 4 结果与分析 | 第30-39页 |
| 4.1 冠状病毒E蛋白的载体构建与表达鉴定 | 第30-34页 |
| 4.1.1 冠状病毒E可溶性鉴定 | 第30-31页 |
| 4.1.2 冠状病毒E蛋白载体构建 | 第31-32页 |
| 4.1.2.1 CoVE目的基因PCR结果 | 第31页 |
| 4.1.2.2 载体双酶切结果 | 第31-32页 |
| 4.1.2.2 His-CoVE菌液PCR鉴定结果 | 第32页 |
| 4.1.3 E蛋白的表达与纯化结果 | 第32-34页 |
| 4.1.3.1 His-CoVE的表达结果 | 第32-33页 |
| 4.1.3.2 His-CoVE的纯化结果 | 第33-34页 |
| 4.2 冠状病毒S1蛋白的载体构建与表达鉴定 | 第34-38页 |
| 4.2.1 冠状病毒S1蛋白可溶性鉴定 | 第34页 |
| 4.2.2 冠状病毒S1蛋白的载体构建 | 第34-36页 |
| 4.2.2.1 pET21b-pSUMO-CoVS1和标签载体的双酶切结果 | 第34-35页 |
| 4.2.2.2 CoVS1融合标签载体的双酶切鉴定结果 | 第35-36页 |
| 4.2.3 冠状病毒S1蛋白的表达与纯化结果 | 第36-38页 |
| 4.2.3.1 冠状病毒S1蛋白的可溶性标签筛选 | 第36-37页 |
| 4.2.3.2 冠状病毒S1蛋白的纯化效果 | 第37-38页 |
| 4.3 冠状病毒E和S1蛋白免疫作用的研究 | 第38-39页 |
| 4.3.1 冠状病毒E和S1蛋白免疫效果 | 第38页 |
| 4.3.2 免疫血清抗体效价检测 | 第38-39页 |
| 5 结论与讨论 | 第39-41页 |
| 5.1 讨论 | 第39-40页 |
| 5.2 结论 | 第40-41页 |
| 参考文献 | 第41-50页 |
| 英文摘要 | 第50-51页 |
